153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
21 153664 22 e) 'N^-benziloxikarbonil-NS-terc.butiloxikarbonil-L-O'rnitin-hidroxif tálimidészter f) Z-Orn(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 1. 2,3 g (2,5 miUimól) H-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBuHacetátot 5 ml dimetilformamidban oldunk és 1,71 g (3,5 millimól) Z-Orn(BOC)-ONP-t adunk hozzá. 24 óra múlva a reakcióelegyet élénk keverés közben 200 ml éterrel hígítjuk. 1:5 perc alatt fehér csapadék képződik. Ezt leszűrjük, éterrel mossuk és megszárítjuk. A kapott heptapeptidszármazék vékonyrétegű kromatográfiai vizsgálat során egységes anyagnak bizonyul az alábbi oldószerrendszerekben : benzol-jaoeton (1:1) iR/ = 0,37 kloroform-metanol (9:1) R/ = 0,47. Vákuumban történő 48 órai szárítás után 2,37 g fehér poralakú terméket (az elméleti hozam 90%-a) kapunk, amely 142—145°-on olvad; [«]20D • == —®8 ±0,5° (c = 2,061 dimetilforrnamidban), —90° ±1° (c — 0,970 metanolban). Ez a termék dimetilformamidban, ecetsavban, alkoholokban és aeetonban oldódik. Acetonitrilben nehezen oldható, ecétészterben, éterben, benzolban és petroléterben oldhatatlan. 2. 429 mg (0,5 millimól) H-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-QtBu 2 ml dimetilfoirmamiddal készített oldatához: 305 mg (0,60 millimól) N-benziloxikorbonilTN-terc.butiloxikarbonil^L-ornitin-hidroxiftálimidésztert adunk. Az •elegyhez 0,14 ml trietilamint adunk, aminek hatására a reakcióelegy vörösre színeződik. lU órai állás után a reakcióelegyet feldolgozzuk, olymódon, hogy kb. 50 ml étert adunk állandó keverés közben az oldathoz, majd V2 óra múlva leszűrjük. Ilymódon 536 mg védett heptapeptidésztert (az: elméleti hozam 89%-a) kapunk, amely analitikai tisztaságúnak és az 1. pont alatt leírt módon kapott termékkel azonosnak bizonyul. g) H-Orn(BOC)-Pro-Val-Lysi(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 1. Ecetsavas só: Az előző bekezdésben leírt módón kapott 1 g (0,:83 millimól) védett heptapeptidésztert 25 ml 80%-os ecetsavban oldunk és a b) alatt -leírt módon hidrogénezzük. A hidrogénezés befejezése után a katalizátort kiszűrjük, alaposan mossuk és az egyesített szüredéket szárazra pároljuk be. Maradékként 956 mg tiszta eoetsavas sót (az elméleti hozam 100%-a) kapunk, amely vékonyrétegű kromatográfiai vizsgálattal nem különböztethető ,meg a szabad bázistól (lásd alább); [«]20 D = — ®7 ±1° (c = 1,028 metanolban), —27 ±1° (c = 1,095 80%-os ectesaVban). 2. Szabad heptapeptidészter: 1 g (0,83 millimól) védett heptapeptidésztert metanolban oldunk és a b) alatt leírthoz hasonló módon hidrogénezzük. A terméket nem kapjuk kristályos alakban, az: így kapott termék azonban már nem tartalmaz reagálatlan kiindulóanyagöt és szilikagél-lemezen végzett vékonyrétegű kromatogratfálás során egységes anyagnak bizonyul; az alábbi R/-értéket mutatja: 52 rendszer = 0,68 kloroformr-metanol (OOJIO) rendszer = 0,13. Stein és Moore szerint lefolytatott teljes hidrolízis és aminosav-elemzés alapján az alábbi aminosav-arányt találjuk: Pro:Val:Tyr:Orn:Lys = 2,04 :2,00 : 0,98 :1,06 : : 1,08. h) Z-Orn(BOC)-Orní(BOC)-P:ro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 2,69 g (2,38 millimól) g) alatti módon kapott heptapeptidészter-aoetátot 5 ml dimetilformamidban oldunk és 1,4 g (2,86 millimól) Z-Orn(BOC)-ONP-t adunk hozzá. Az: elegyet éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd nagyvákuumban bepároljuk. Barna gyantaszerű maradékot kapunk, amelyből 100 ml meleg aoetonitril hozzáadása után fehér csapadék képződik. 3 óra hosszat hagyjuk 0° hőmérsékleten állni, majd leszűrjük és a kapott poralakú terméket acetonitrillel, majd éterrel mossuk. Az így kapott terméket megszárítva 3,15 g oktapeptidésztert (az elméleti hozam 93%-a) 10 15 20 25 S0 S5 40 45 50 55 60 3,66 g (10 millimól) N«-Z-NS-BO'C-L-Orn-OH 5 ml vízmentes piridinnel készített oldatát 5 —10° hőmérsékletre hűtjük le és 2,06 g (10 millimól) diciklohexil-karbodiimid 5 ml piridinnel készített oldatát adjuk hozzá. 5 perc múlva 1,96 g N-hidroxilftálimidet adunk az elegyhez és 16 óra hosszat hagyjuk álni 0° hő- 10 mérsékleten. Ezután leszűrjük és a csapadékot piridinnel utánamossuk. A szüredéket vákuumban 40° 'hőmérsékleten mentesítjük a piridintől, szek.butanolt adunk hozzá, ismét szárazra pároljuk, majd kevés éterrel felvesszük. 48 óra 15 hosszat hagyjuk —8° hőmérsékleten állni, majd a kapott kristályokat elkülönítjük; 4,5 g nyers terméket (az elméleti hozam 88%-a) kapunk, amely 125'—127°-on olvad. A nyers kristályos terméket acetonitrillel 20 melegítve oldjuk, a visszamaradt diciklohexilkarbamidot és hidroxiftálimidet kiszűrjük és a szüredéket diizopropiléter hozzáadásával kristályosítjuk. 3,12 g tiszta terméket kapunk (az elméleti hozam 61%-a). Az izopropilalkoholból 25 átkristályosított termék 129°-on olvad; [a ] 27 o = —25,7° (c = 1 metanolban). 11
