153664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
23 153664 24 kapunk, amely 152—154°-on olvad; [«]2, D = —83,3 ±0,5° (c = 1,046 metanolban). Ez a termék szilikiagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során egységesnek mutatkozik és az alábbi R/-értékeket mutatja: kloroform-metanol '(95:5) = 0,54 benzol-aceton (1:1) = 0,56. Az oktapeptidészter dimetilformamidban, ecetsavban, metanolban és etanolban oldódik, forró ácetonitrilben kevésbé oldódik, etilaieetátban és éterben oldhatatlan. i) H-Orn:(BOC)-Omi(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-TjovPro-OtBu 1. Ecetsavas só:. A fenti módon kapott védett oktapeptidésztert 80%-os ecetsavban oldjuk és a g) alatt leírthoz hasonló módon hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után a szüredéket 80°-ot meg nem haladó fürdőhőmérséklet mellett bepároljuk. A kapott termék szilikagél-lemezeken történő vékonyrétegű kromatografálás során egységes anyagnak bizonyul és az alábbi R/-értékeket mutatja: kloroform-metanol (95:5) = 0,06 kloroform-metanol (9:1) = 0,22 kloroform-metanol (85:15) = 0,26' benzol-aceton (1:1) = 0,03. [a ] 25 D = —49,4 ±1° (c = 0,942 dimetilformamidban) [a]26D = __85,6 ±1° (c = 1,26(6 metanolban). 2. Szabad oktapeptidészter: 500 mg fenti módon kapott védett oktapeptidésztert metanolban oldunk és a b) alatt leírthoz hasonló módon hidrogénezzük. Ilymódon 441 mg szabad bázist (az elméleti: hozam 96%-a) kapunk. Ennek R/^értékei nem, különböznek a fentebb leírt ecetsavas só megfelelő értékeitől; [«]25 D = —51,8 ±1° (c = 1,247 dimetilformamidban), [a]26 D = —67 ±1° (c = 1,079 metanolban). j) Z-Ly9(BOC)-Pro-Val-Gly-JLys(BOC)-Lys(BOe)^Orn(BOC)<)m'(BOe)-Pro-Val-LyS(BOC)-Val-Tyr-.Pro"OtBu 900 mg (0,080 millimól) Z-Lysl(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOe)-NH-N'H2 heptapeptidhidrazidot, .amely pl. a 84 475 sz. francia pótszabadalmi leírásban leírt módon állítható elő, 9 ml tiszta dimetUformamidban oldunk és az oldatot —10° hőmérsékletre hűtjük le. 1,6 ml 2 n sósavoldatot és 0,18 ml 5 n nátriumnitritoldatot adunk hozzá, majd 10 percig keverjük •—10°-on és, azután 900 mg (0,67 millimól) i) alatti módon előállított oktapeptidacetát 9 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk hozzá. Ezután még 0,53 ml (4,0 millimól) trietilamint adunk az elegyhez és li8 óra hosszat hűtőszekrényben állni hagyjuk. Az; oldatot nagyvákuumban szárazra pároljuk be és a maradékot acetonitrillel eldörzsöljük. Az aoetonit-5 rilben oldhatatlan tetradekapeptid-származékot leszűrjük és 25^—25 ml acetonitrillel háromszor mossuk. 1,554 g gyengén sárgás színű terméket kapunk (az elméleti hozam 98%-a), amely a véld konyrétegű kromatografálás során csupán nyomokban mutat egy szennyezést. A kiindulóanyagok egyike sem mutatható ki a termékben. Szilikagélen az alábbi !R/-értékeket kapjuk: 15 kloroform-metanol (95:5) = 0,31 dioxán-víz (95:5) = 0,76. A kapott termék amorf, de éles olvadás-20 pontot mutat 192—194°-on; [«]25 D = —37,8 +1° (c = 1,050 dimetilformamidban). Az elemi analízis adatai szerint ez a peptidszármazék dihidrát alakjában van jelen. 25 k) H-Lys(BOiC)-Pro-Val-Gly-Lysi(BOC)-Lys;(BOC)jOrni(BOC)-Orni(BOG)-Pro-Val-Lys)(BOC)-Val-Tyr-Pro^OtBu-tozilát A fenti módon kapott 1 g (0,42 millimól) vé-S0 dett tetradekapeptidésztert 150 ml metanolban szuszpendáljuk és 40° hőmérsékleten teljes oldódásig rázzuk a szuszpenziót. Ezután 4001 mg 5%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk hozzá és hidrogén-légkörben, 40° hőmérsékle-S5 ten 18 óra hosszat rázzuk. A katalizátort kiszűrjük, a, szüredékből az oldószert elpárologtatjuk; ilymódon 79)3 mg (az elméleti hozam 84%-a) észtert kapunk. Ezt az észtert toziláttá való átalakítás cél-40 jából 5 ml piridinben oldunk, 70 ml p-toluolszulfonsav 1 ml piridinnel készített oldatát adjuk hozzá, a piridint vákuumban elpárologtatjuk, a száraz maradékot éterrel eldörzsölve és dekantálva többször mossuk. A terméket meg-45 szárítva 721 mg tetradekiapeptidészter-tozilátot kapunk amorf por alakjában. Ez a termék a vékonyrétegű kromatografálás során gyakorlatilag egységes anyagnak mutatkozik és az alábbi R/^értékékét mutatja: 50 43C rendszer = 0,49 52 rendszer = 0,61. 1) BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-55 Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys:(BOC)-Orn)(BOC)-Orn!(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 400 mg fenti módon kapott tetradekapeptid-60 észter-tozilátot és 350 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH-ot (vö. 1. példa) 5 ml piridinben szuszpendálunk . és a szuszpenziót nitrogén-légkörben 50° hőmérsékleten addig keverjük, míg mind a két 65 anyag nem. oldódik, amihez kb. 2 óra sziüksé-12
