153173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,4-androsztadién-3,17-dion mikrobiológiai előállítására

! 1-53173 dard görbéről leolvasva megállapítottuk az extraktum szteroid-tartalmát. A találmány szerinti eljárásnak előnye, hogy 4-kolesztén-3-onból l,4-androsztadién-3,17-dion keletkezik. Ez a vegyület ugyanis pirolízissel 5 egy lépésben ösztronná alakítható, és így a.félszintetikus ösztron-gyártás kulcsanyaga. Eddig progeszterónból, illetve 4-androsztén-3,17-dionból állították elő, tehát a kiindulási anyag már egy viszonylag drága szteroid volt, amelyet 10 hosszas kémiai szintézissor segítségével nyertek, pl. ergosziterinből vagy szteroid-szapogeninekből vagy szteroid-alkaloidokból (dioszgenin, szolaszodin, tomatidin stb.). Eljárásunk lehetővé teszi nehézkes szintézisek megkerülését, és új, 15 olcsó szteroid-alapanyaggá változtatja a világszerte nagy mennyiségben rendelkezésre álló koleszterint. A keletkező l,4-androszfcadién-3,17-jelentősége azonban nem merül ki abban, hogy ezen a vegyületen keresztül ösztronhoz, ill. szár- 20 mazékaihoz juthatunk, hanem antikoncipiensek és anabilikumok gyártását is nagymértékben leegyszerűsíti. Ezek a vegyületek ugyanis legnagyobbrészt a 19-nor szteroidok; közé tartoznak; az utóbbi vegyületeket viszont ösztronból 25 lehet előnyösen előállítani. Az antikoncipiensek és anabolikumok népegészségügyi jelentősége rohamosan emelkedik, ezért minden olyan eljárás fokozott érdekességű, amely ezen anyagok gyártását olcsóbbá teszi. Az eljárásunkkal ter- í0 melt _ l,4-androsz,tadjén-3,17*dionból előállított ösztron pedig nagyságrenddel olcsóbb, mint ha a fentebb vázolt eljárásokkal készítenék. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg: 35 1. példa: 2 db 500 ml-^es Erlenmeyer-lombikban 100— .100 ml steril III. jelű táptalajhoz- oltás előtt 40 10%-os oldatban sterilezett 200—200 mg Tween 80-at tettünk, és 5-napos ferdeagar tenyészetből 10 ml "steril bouil-lonnal készített Mycobacterium smegmatis szuszpenzió 1—1 ml-ével beoltottuk. Növesztés 3 napig 28 C°-on rázóaszta- 45 Ion. A kinőtt tenyészeteket ülepítettük, és a táptalajt azonosi térfogatú steril 0,4%-os NaCl.oldatra cseréltük ki. Az egyikrlombikhoz 20 mg, a másikhoz 80 mg 4-kolesztén-3-ont adagoltunk 1 ml alkoholban, oldva, és mindkettőhöz 7,2— 40 7,2 mg 8-oxikinolint 0,5 ml acetonban oldva. A lombikokat 37 C°-on rázatva, az elsőt 48 óra, a másodikat 72 óra hosszat inkubáltuk. Ebben 'az időpontban a tenyészeteket kétszer 26 ml diklóretánnal extraháltuk, az extraktumot víz- 55 mentes nátrium-szulfáttal víztelenítettük, az első ' lombik extraktumából 12,5 ml-t, a másodikból 3jl ml-t pároltunk be. A bepárolt maradékokat 2 ml acetonban vettük fel, é esbből a kohcentrátumból 100 [A-t cseppentettünk fel Macherey— 60 Nagel 214-es papírra kvantitatív papírkromatográfiához. Az első lombikban 6,8 mg, a másodikban 21 mg l,4-androsztadién-3,17-dion tartalmat mértünk. Ez megfelel 34, ill. 25 súlyó/o-os; 46," ill. 35,5 elméleti%-os termelésnek. 65 2. példa: 10 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban 100— 100 ml-steril II. jelű táptalajt az 1. példában leírt módon oltottunk és növesztettünk. A táptalajt azonos térfogatú steril 0,4%-os NaCloldatra cseréltük, és mindegyik lombikhoz 20— 20 mg 4-kolesztén-3-oht adagoltunk 1—1 ml alkoholban oldva. Az egyes lombikokhoz a következő gátlószereket adtuk a 4-kolesztén-3-on adagolásával egyidőben: 1. 7,2 mg 8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 2. 4 mg 3-metil-8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 3. 4 mg 7-metil-8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 4. 3 mg 8-oxikinolin-7-karbonsav 3 ml vízben, oldva 5. 4 mg 5-aceto-8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 6. 3 mg 5-butiro-8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 7. 4 mg 5-izovalero-8-oxikinolin 0,5 ml acetonban oldva 8. 7,2 mg 5-klór-7-jód-8-oxikinolin (vioform) ,3 ml vízben oldva 9. 4 mg 8-oxikinolin-Echtblau-azovegyület 0,5 ml acetonban oldva 10. gátlószer nélkül. Ezután a lombikokat 37 C°-on rázatva inkubáltuk 48 óra hosszat. A tombiko'kban keletkezett l,4-androszta-diién-3,17-diont az 1. példa szerinti módon extraháltuk és határoztuk meg. A kapott értékek: lombik sorszáma 1. , 2. 3. 4. 5- . 7. 8. 9. 10, l,4-androsztadién-3,l 7-dion 6.6 mg 6.4 mg 6.7 mg 6.5 mg 6.5 mg 6,7 mg 6,4 mg 6.6 mg 6.7 mg 0,8 mg 3. példa: 5 db .500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő steril III. jelű táptalajt 1—1 ml olyan Mycobacterium smegmatis szuszpenzióval oltottunk, amelyet az. 1. példának megfelelően készítettünk. A lombikokhoz külön 10%-os vizes oldatban sterilezett (121. C°, 20 perc) különböző Tweeneket adtunk 100—100 rng mennyiségbén. 1. lombik Tween nélkül 2-60 3- „ * 80 4. „ 81 5. „ • 85 3