153173. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,4-androsztadién-3,17-dion mikrobiológiai előállítására
153173 8 A lombikokat 37 C°-on növesztettük 48 óráig rázatva. A táptalajt azonos térfogatú 0,4%-os steril NaCl-oldatra cseréltük, és 20—20 mg 4^ -kolesztén-3-ont 1 ml alkoholban, és 7,2 mg 8-oxíkinolint 0,5 ml acetonban oldva adagoltunk a lombikokhoz. A lombikokat tovább inkubáltuk 37 C°-on rázatva 48 óra hosszat. A keletkezett l,4-nandrosztadién.-3,17-diont ez l. példa szerinti módon extraháltuk és határoztuk meg. A kapott értékek: lombik sorszáma 1. 2. 3. 4. 5. 1,4-androsztadién-3, \ 7-dion 1,6 mg 3,6 mg 6,5 mg 6,3 mg 6,8 mg 4. példa: 5 liter I. jelű táptalajt sterileztünk 1.0 literes üvegfe'rmentorban 4§ percig. Beoltottuk 100 ml 3-napos 28 C°-on növesztett tenyészettel (táptalaj és oltóanyag: mint az 1. példában), és 100 ml 10%-os külön sterilezett Tween 80 oldatot adtunk, hozzá. A fermentor hőmérsékletét 37 C-on tartottuk; a levegő mennyisége 5 liter/ perc és a keverő fordulatszáma 300/perc volt. A két nap alatt kinőtt tenyészetet a keverés leállításával ülepedni hagytuk, és a táptalajt azonos térfogatú 0,4%-os steril NaCl-oldatra cseréltük ki. 1 g 4-kolesztén-3-ont és 360 mg &-oxikinolint adagoltunk be 50 ml alkoholban oldva. A fermentálást 48 óráig folytattuk, a növesztésnél leírt körülmények között. A fermentlét centrifugáltuk, a felülúszót 3-szor 833 ml diklóretánnal extraháltuk. Ebből 12,5 ml-t bepároltunk, és az 1. példában leírt módon meghatároztuk az l,4-androsztadién-3,17-dion tartalmát, amely 280 mg-nak. adódott. Az extraktum főtömegét szárazra pároltuk. A száraz maradékot metanolban oldva némi oldhatatlan szennyezést szűrtünk ki. Ezután 20% vizet tartalmazó metanol- és petroléter között megoszlatva, a petroléteres fázissal apoláris 5 szennyezéseket távolítottunk el. A vizes-metanolos fázist kis térfogatra töményítettük, vízzel hígítottuk, majd diklóretánnal többször extraháltuk. Az extraktumokat egyesítettük, szárítottuk és szárazra pároltuk. 300 mg báta-10 -naftolt 6 ml diklóretánban oldottunk melegítés közben, majd az előbbi száraz maradékhoz öntve, ugyancsak melegen azt is feloldottuk. 24 órán keresztül 0 C°^on tartottuk, és a kristályos 1,4-androszladién-3,17-dion-^-naf t ol molek ula-15 vegyületet szűrtük (op. 168—710 C°), majd 100 ml diktóreitánban oldottuk- 1%-os vizes NaOH-oldattal extraháltuk 'a. ^-naftol eltávolítása végett. A diklóretános oldatot szárítás után szárazra pároltuk, és kevés éterből kristályo-20 sítottuk.' A kristályos l,4-arairosztadién>-3,17--rdiont másnap szűrtük, és szívatással szárítottuk. Op. 139—142 C°; [á]D ;115° (c=l, k}<>roform) 2mSH : 243 m/x, logs : 4,21. 25 /Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás l,4-androsztadién-3,17-rdk>n mikrobiológiai előállítására, amelyre jellemző, hogy félszintetikus táptalajon tenyésztett Mycobactec0 rium smegmatis törzs (letétbe helyezve 27. sz. alatt az Országos Közegészségügyi Intézet törzsgyűjteményében) sejtjeivel aerob fermentációs körülmények mellett 4-k.oleszítén-3-ont kinolinszármazékok, célszerűen 8-oxikinolin jelenlété-25 ben lebontunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, amelyre jellemző, hogy a Mycobacterium smegmatis törzs növesztésére alkalmazott félszintetikus táptalajhoz külön sterile-40 zett polioxietilénszorbitánmonooleát vagy polioxietiléflszorbitántrioleát oldatot adunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganáitosltási módja, amelyre jellemző, hogy az átalakítást 0,4—0,9%-os NaCl oldatban szusz-45 pendálf Mycobacterium smegmatis sejtekkel végezzük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6609309. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest, V., Balassi Bálint utca 21—23.
