152871. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás anyarozs oltóanyag fermentációs úton való előállítására

152871 3 • . • val szintén spóraszám-emelkedést észleltünk. Arra a felfedezésbe jutottunk, hogy ha a fermentáció 70—100. órájában a tenyészeten átáramoltatott levegő mennyiségét tizedére csökkentjük a spóraszám a fermentáció 100—200. Órájában erős emelkedést mutat a kontrollhoz képest. A találmány szerinti eljárás kivitelére az alábbi példákat adjuk meg: 1. példa: Az oltóanyag előállításához a Claviceps purpurea törzset rozskalászon kifejlődött sclerotiumból állítottuk elő. A sclerotiumot steril kémcsőben abszolút alkoholban áztattuk 1/2 órán át. Az alkohol leöntése után steril fiziológiás konyhasó oldatbal mostuk háromszor, majd steril dörzscsészében eldörzsöltük s az így nyert selerotiumból kacsnyi mennyiséget petricsészébe merevített malátás-agar táptalajra helyeztünk. A tenyészetet 27 C°-on inkubáltuk, 6*—8 nap alatt fehér színű telep nőtt ki. Ezt a telepet szélesztettük, ugyancsak petricsészébe merevített malátás-agar táptalajra, majd 27 C°-on inkubáltuk, 4—6 nap után a dúsan növekvő fehér telepekről malátás ferde-agar táptalajt oltottunk, ismét 27 C°-on inkubáltunk és ezeket a tenyészeteket használtuk fel az inoculum készítésére. Inokulum készítés: A ferde-agar tenyészeteket 5 ml. fiziológiás konyhasó oldattal mostuk le, ezen maradék 2 ml.-vel 500 ml.-es Erlenmeyer lombikban levő 100 ml. C I. jelű táptalajt oltottunk, melynek összetételé a következő: Kukoricalekvár sz., a. Maláta Magnéziumszulfát Káliumdihydrofoszfát 0,5 % 10,0 % 0,05% 0,05% A tenyésztést percenként 350<—400 fordulatszámú rázógépen 27 C°-on végeztük, 4—5 nap után a tenyészet megfelelő sűrűséget ért el. Ezután 10 literes üvegfermentorban 5 liter C. I. jelű táptalajt oltottunk a fenti tenyészet 100 ml.-ével. A keverő fordulatszáma percenként 300—400, hőmérséklet 27 C° volt, táptalaj literenként 1 fiter steril levegőt áramoltattunk át. A tenyésztést 3—5 napig végeztük. A tenyészet tisztaságát, tisztasági próbával, a növekedést mikroszkópi készítménnyel, ellenőriztük. Fermentáció: 1000 liter C. melynek összetétele: 10 Maláta réz-vas- és mangán-szulfát étolaj (napraforgóolaj) 15 20 25 30 35 40 45 II. jelű táptalajt, 20 % 10 gamma/ml., 0,25% oltottunk, a fenti tenyészet 20 literével. Hőmérséklet 27 C°, a' keverő fordulatszáma percenként 150 volt, a tenyésztés 70—100. órájáig táptalaj literenként 1 liter steril levegőt áramoltattunk át, majd a levegő mennyiségét a tenyésztés 72. órájában táptalaj literenként 0,1 literre csökkentettük. A fermentorból 24 óránként mintát vettünk, a gomba fejlődését mikroszkópi készítményben, a tenyészet tisztaságát, tisztasági próbával ellenőriztük, meghatároztuk a pH-t és spóraszámlálást végeztünk. A fermentációs idő célszerűen 200—250 óra, ezalatt a spóraszám elérte az 500—800 millió/ml. értéket. Á fermentáció befejeztével a fermentlevet szeparáltuk, majd centrifugáltuk. Az így nyert spóratömeg megfelelő szárítással az anyarozs előállításához alkalmas oltóanyagot szolgáltatott. Száraz, hűvös helyen tárolva fertőzőképességét több hónapon át megtartotta. 2. példa: A táptalajhoz nyomelemeket adagolva jelentős spóraszám emelkedést tudtunk elérni. < A Claviceps purpurea törzs 6 napos ferdeagar tenyészetét 5 ml. fiziológiás konyhasó oldattal mostuk le. A törzs-mosadék 2 ml.-vel 500 ml. Erlenrneyer lombikban 100 ml. C. I. összetételű inoculum táptalajt oltottunk. A tenyésztést 27 C°-on, percenként 350—400 fordulatszámú rázógépen végeztük 72. óráig. Az inoculum 100 ml.-vel 10 l-es üvegfermentorokat oltottunk, melyekben 5 liter táptalaj volt. A táptalaj minden esetben 20% malátát tartalmazott, valamint az alábbi táblázat szerinti nyomelem mennyiségeket: r ermenTOr jele Nyomelem mennyiség I. III. 5 gamma/ml. réz-vas-mangán-szulfát \V-10 gamma/ml. réz-vas-mangán-szulfát VI. 15 gamma/ml. réz-vas-mangán-szulfát S--p ó r a s z á m/ml 168. óra 264. óra 440 millió 465 millió 480 millió 470 millió 505 millió 570 millió 635 millió 600 millió A fermentációt 27 C°-on végeztük, percenként 350 fordulatszámú keverővel. Táptalaj literénként és percenként. 1 liter steril levegőt áramoltattunk át a tenyészeteken. Mint a táblázat mutatja nyomelemek adagolásával — előnyösen 10 gamma/ml. mennyiségben — a spóraszám emelhető. 65 2