152871. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás anyarozs oltóanyag fermentációs úton való előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1964. XII. 17. (SA—1588) Közzététel napja: 1965. XI. 22.v Megjelent: 1966. VIII. 15. 152871 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Deci mái osztályozás: Dr. Szabó Szűcs János, állatorvos,; Dr. László Pálné vegyész, Pacsay Ágoston, asszisztens, Budapest. Űj eljárás anyarozs oltóanyag fermentációs úton való előállítására 1 A gyógynövények közül az anyarozs termesztés az egyik legjelentősebb gyógyszeralapanyag termelési ággá fejlődött' napjainkban. Ezért szükségessé vált a nagyüzemi termelés megvalósítása. Ennek kifejlődése csak korszerű techni- 5 káivaj előállított oltóanyag segítségével képzelhető el. ( A klasszikus módszer szerint a Claviceps purpurea nevű gombatörzset az ún. Román palackokban merevített agar-táptalaj felületén te- 10 nyésztették 3—4 hétig. Ezen idő alatt és a további tárolás folyamán képződött spórákat a fertőzés színhelyére kiszállított palackokból vízzel kimosták, s az ily módon nyert spóraszuszpenzióval fertőzték az éppen virágzás előtt álló 15 rozskalászokat. Egy katasztrális hold rozsivetés fertőzéséhez 15—20 tenyészedényt kellett felhasználni. A modern nagyüzemi > termeléshez szükséges nagy mennyiségű oltóanyag e klaszszikus módszer munkaigényessége, a nagy fer- 20 tőzési és törési selejtek, valamint a magas szállítási költségek miatt nem volt gazdaságos. ' Ezen nehézségek kiküszöbölésére eljárást dolgoztunk ki, Claviceps purpurea,, spóratenyészetek fermentációs úton való előállítására. 25 A találmány értelmében az oltóanyag termeléséhez szükséges törzsét a rozskalászon kifejlődött sclerotiumból állítottuk elő. A sclerotiumot steril kémcsőben abszolút alkohollal áztattuk 1/2 órán át. Az alkohol leöntése után steril fi- 30 ziológiás konyhasó oldattal háromszor átmostuk, majd sterill

dörzscsészében eldörzsöltük s az így .nyert sclerotiumból kacsnyi mennyiséget petricsészébe merevített malátás-agar táptalajra helyeztünk. A tenyészetet 27 C°-on inkubáltuk, 6—8 nap alatt fehér színű telep nőtt ki. Ezt a telepet szélesztettük ugyancsak petricsészébe merevített malátás-agar táptalajra, majd 27 C°-on inkubáltuk. 4—6 nap után a dúsan nö^ vekvő fehér telepekről malátás ferde-agar táptalajt oltottunk, ismét 27 C°-on inkulbáltunk és ezeket a tenyészeteket használtuk fel az oltóanyag előállítására. Az általunk szelektált, törzset folyékony táptalajon tenyésztve, használtuk fel a további kísérletezésre. A kísérleteket 10 literes üvegfermentorban végeztük, 27 C°-on a 350—400 fordulatszámú keverővel. Arra a meglepő felfedezésre jutottunk, hogy 20% malátát tartalmazó táptalajunkhoz 5—15 gamma/ml., mennyiségben nyomelemeket adagolva a spóraszám jelentősén emelkedett. Kísérleteink folyamán különböző habzásgátlókat próbáltunk ki és arra a felfedezésre jutottunk, hogy a 20% malátát és 10 gamma/ml. vas-réz- és mangán-szulfátot tartalmazó táptalaj on, habzásgátlóként napraforgóolajat alkalmazva, 20—30%-os spóraszam-emelkedés volt elérhető. A tenyészeten a fermentáció folyamán átáramoltatott levegő mennyiségének a változtatásá-152871