152863. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nisztatin kinyerésére

3 152863 4 essék). Bár az alkanol, a sav és az amin hozzáadását tetszőleges sorrendben végezhetjük, meglepetéssel tapasztaltuk, hogy ha a savat és az amint együtt adjuk hozzá az amin savaddíciós sójaként, úgyhogy a vizes alkíanolos. oldat pH-ja nem változik széles határok között, miként Változna, ha a savat és az amint külön adnánk az oldathoz, ami a nisztatin bomlását okozhatnia, a nisztatin ez esetben is kioldódik. Ezért e találmány szerinti eljárás előnyös foganatosítási módja értelmében a tercier amin ásványi savas addíciós sójának (pl. trietilaminszulfátnak vagy legelőnyösebben trietanolaminszulfátnak) vizes rövidszénláncú alkanolos oldatát használjuk extraihálószerként. Bár a hozzáadott alkanol mennyiségének nincs döntő jelentősége, a nedves micéliumlepény minden grammjára legalább kb. 2 ml" alkanolt célszerű használni, hogy a nisztatin gyakorlatid lag teljesen kioldódjék a micéliumból a vizes alkanolba. Nehogy azonban a kivonás után sok oldószert kelljen eltávolítani, a találmány szerinti eljárás előnyös foganatosítási módja szerint legfeljebb kb. 2,5 ml alkanolt használunk a micélium minden grammjára számítva. Bár az amin mennyiségének nincs döntő jelentősége, az előnyös amintartalom kb. 0,02 -rkb. .0,05 ml amin minden, milliliter alkanolria számítva. A használt sav mennyiségét úgy állítjuk be, hogy végül is a fent említett pH-közt adja. A víz mennyisége sem döntő, célszerű azonban, ha legfeljebb kb. 0,25 ml víz van jelen minden milliliter alkanolra kivonás közben. _• Az alkanolt, az amint és a savat tehát a rmcéliuimihoz adjuk a nisztatin feloldására. Miután a nisztatin feloldása, szükség esetén keveréssel elősegítve, befejeződött, a kimerült micéliuimot szűréssel vagy centrifugálással eltávolítjuk. . Hogy minden nisztatin biztosan ki legyen oldva a micéliumból, a micéliumot további alkanöllal kimoshatjuk. Ezután a nisztatin kinyerésére a szüredéket (és az azzal egyesített mosófolyadékot) vízben betömenyítjük, és egy vízzel elegyedő ketont, például acetont adunk hozzá. Az így kapott elegyet kib. 45—55 C°-ra (legelőnyösebben kb. 50—52 C°-ra) melegítjük, majd lehűtjük, mire gyakorlatilag tiszta nisztatin kristályosodik ki az oldatból, és kinyerhető. Az alábbi páldák szemléltetik a találmány szerinti eljárás néhány foganatosítási módját. 1. példa: (a) A micéiium elválasztása: Strepto'myces noutrseinek vizes szójalisztes — melaszos táptalajon való fermentálása útján kapott szüretlen nisztatinos fermentációs léhez 4% szűrést elősegítő szert adunk. A kapott keveréket leszűrjük, és a micéliumot kinyerjük. (b) A nisztatin kivonása a micéliumból: Az (a) lépésben kapott mioéliumot szuszpendáljuk kb. 10 térfogat metanolban, kénsawal 3 pH-ra állítjuk be, hét percig keverjük, trietilaminnal közömbösítjük, és szűrjük. A szüredéket eredeti térfogatának kb. 1/20 részére töményítjük, és a kapott zagyot 45 C°-on kikristályosítjük, miután azonos térfogatú 40%-os vizes acetonnal felhígítottuk. A csapadékot kicentrifugáljuk, ismét szuszpendáljuk 40%-os vizes acetonban, újra centrifugáljuk, ismét szuszpendáljuk acetonban, újra centrifugáljuk és megszárítjuk. A kapott nisztatin hatóképessége kb. 4000 egység/mg, hőállóbb, mint a korábbi módszerekkel kinyert nisztatin, , és hamutartalma kevesebb, mint 1%. 2. példa: Metanolos oldatot készítünk, 2 térf.% trietilamint adva a metanolhoz, majd 40%-os vizes kénsavval 6-r.a csökkentjük" az oldat pH-ját. Ezután az 1. példa (a) lépése szerint kapott micéliumot hozzáadjuk a metanolos trietilaminszulfátos oldathoz, úgyhogy a végső metanoltartlalom kb. 90%-. Ezután a keveréket fél óra hosszat erőteljesen keverjük, a pH-ját trietilaminnal 6,8-ra állítjuk be, és szűrjük. A szűrőlepényt 90%-os metanollal (a kivonat térfogatának Í0%-ával) mossuk, majd a szűrőlepényt eltávolítjuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítjük, és az eredeti térfogatnak kb. 1/20 részére töményítjük. Eközben lényegében az egész metanol eltávozik. A koncentrátumhoz 2 térfogat 60%-os vizes acetont adunk. A keverék pH-ját trietilamin vagy kénsav hozzáadásával 6,5-re állítjuk be, egy órára 50—52 C°^ra melegítjük, 1—1,5 óra alatt szobahőmérsékletre hűtjük, és ott tartjuk 5—6 óra hosszat. Ezután a kristályos terméket szűrőre visszük, a nedves termék, minden grammjának megfelelő 5 ml 40%-os vizes acetonban szuszpendáljuk, szűrőre visszük, 10 ml acetonban szuszpendáljuk, és a szokott módon vákuumban megszárítjuk. Kristályos nisztatint kapunk 75—90% hozammal, kb. 4500 egység/mg hatóképességgel. A termék 100 C°-on kb. 48 óra hosszat állandó. 3. példa: Metanolos oldatot készítünk, 4~7íérf.% trietanolamint adva a metanolhoz, majd 40%-os vizes kénsayval 6-ra ősökkéntjük az oldat pH-ját. Ezután az L példa (a) lépése szerint kapott micéliumot hozzáadjuk a metanolos trietanolaminszulfátos oldathoz, úgyhogy a végső metanoltartalom kb. 80%. Ezután a keveréket fél óra hosszat erőteljesen keverjük, és leszűrjük. A szűrőlepényt 85%-os vizes metanollal (a kivonásra használt metanol 20%^a) mossuk, majd a szűrőlepényt eltávolítjuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítjük, és az eredeti térfogatának 1/10-ére töményítjük. A koncentrátumhoz három térfogat 60%-os vizes acetont adunké a pH-t beállítjuk 6,5-re (kénsavval vagy trietanolaminnal), a keveréket egy órára 50—52 C°-ra melegítjük, 1—1,5 óra alatt 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 00 a