152732. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
152732 19 20 kukoricalekvár 6 kg keményítő 2 kg szójaolaj 3 lit kofealtklorid (6 H2 0) 4 g vízzel feltöltve 175 -literre A közeg pH-értékét 380 ml tömény nátronlúg (fs.=l,33) hozzáadásával 5,90^re állítjuk be, majd még 1 kg kalaumkarbonátot is hozzáadunk a tápköeghez. 1° Ezt a tápközeget azután gőzbevezetés útján 40 percig sterilizáljuk 122 C° hőmérsékleten. Teljes lehűlés után 0,4 kg ammóniumszulfát vízzel 5 liter térfogatra feltöltött steril oldatát adjuk a tápközeghez. 15 Az így elkészített tápközeg térfogata 200 liter, pH-értéke 6,80. Ezt a tápközeget a 170 literes fermientorban tenyésztett inokulum-kultúiia 20 literjével oltjuk be. A fermentációit 144 óra hosszat folytatjuk 26—27 C° hőmérsékleten, ke- 20 verés és steril levegővel történő szellőzés közben. A kultúra végső pH-órtéke 8,40, a kapott' fermentációs lé térfogata 185 liter. A fermentációs lében jelenlevő antibiotikum mennyisége 3550 E/ml. 25 3. példa. keverőberendezésisel felszerelt tartályban 5 n sósavoldat hozzáadásával 7-re állítjuk be, majd klorid-ciklusban levő Dowex 1X2 ioncserélő gyanta 22,5 literjét adjuk Jaozzá. A keverést 2 óra hosszat folytatjuk. Ezután az elegyet rázószitán vezetjük keresztül. A gyanta a szitán marad; az átfolyó levet kiselejtezzük. A gyantát azután egy oszlopba töltjük, és előbb 50 liter 5%-os vizes nátriumkloridoldattal, majd 10 liter vízzel mossuk. Az így mosott gyantát azután 20 liter metanol átvezetése útján víztelenítjük. Az eluálásit 20% vizet és 2,8% ammóniumkloridot tartalmazó metanollal végezzük. Az eluátumokat 10 literes frakciókban fogjuk fel. Az első mellékfrakció tartalmazza az eluált antibiotikum-Jakitwitás 98%-át. Ezeket a frakciókat egyesítjük, és csökkentett (20 mm Hg-oszlop) nyomás alatt 3 liter térfogatra pároljuk be. Az így kapott tömény oldat sűrűsége 1,057, antibiotikum-tartalma 92,950 E/ml; ezt a tömény oldatot 48 óra hosszat dializáljuk eellofándiafragmával, desztillált vízvárammal szemlben. Ennek az időnek az elteltével az oldat térfogata 4,7 liter, sűrűsége 1,025. Ezt az oldatot csökkentett (5 mm Hg-oszlop) nyomás alatt 300 ml térfogatra töményítjüfc be, majd liofilizálásnak vetjük alá. Ilymódon 48 g nyers terméket kapunk, amelynek antibiotikum-aktivitása 6530 E/mg. 200 liter fermentációs levet, amelynek pH-ér- 30 teke 8,4, antibiotikum-tartalma pedig 2855 E/ ml, 5 n sósavoldat hozzáadásával, keverővel felszerelt tartályban 3 pH-értékre állítunk be. Ezután 12 kg szűrési segédanyagot adunk a léhez, szűrőprésen leszűrjük, és a szűrőlepényt 60 liter 35 vízvezetéki -vízzel mossuk. A szűredék és a mosóvíz gyakorlatilag nem tartalmaz antibiotikumot;-ezeket, a csatornába eresztjük le. A szűrőlepényt 150 liter 2:1 térfogatarányú butanolmetanol elegyben szuszpendáljuk keverés közr- 40 ben. Az: elegy látszólagos pH-értékét 10 n náfrriumhidroxióldat hozzáadásával 6-ra állítjuk be. A keverést még 30 percig folytatjuk, majd szűrőprésen ismét leszűrjük. A szűredéket felfogjuk, a szűrőlepényt pedig 45 30 liter 2:1 térfogatarányú butanol-metanpl eleggyel mossuk, és a mosófolyadékot is hozzáadjuk a szűredékhez. Az így kapott folyadék, amelynek térfogata 185 liter, 2075 E/inl antibiotikumot tartalmaz. A szűrőlepényt kiselej- 50 tezzük, az alkoholos szűredéket pedig csökkentett (20 mm Hg-oszlop) nyomás alatt, 35 C° hőmérsékleten 2 liter térfogatra töményítjük be. A betöményítés folyamán leváló antibiotikumot azután szűréssel elkülönítjük, acetonnal 55 mossuk, majd vákuumban (5 mm Hg-oszlop nyomás alatt) megszárítjuk. Ilymódon 254 g zöldesszürke színű terméket kapunk, amelynek antibiotikumyaktivitása 1025 E/mg. 4. példa. S0 375 liter fermentációs levet, amelynek pH-értéke 7,9, a nagyabb méretű szilárd részecskék eltávolítása céljából leszűrünk^ A lé pH-értékét 65 5. példa. 250 g nyers antibiotikumot, amelyet a 3. példában leírt módon állítottunk elő, 4 liter vízben oldunk 8 pH-értek mellett. A 'kapott vizes oldatot leszűrjük, majd egy oly oszlopon vezetjük keresztül, amely 2,7 liter klorid-ciklusban levő Dowex 1X2 ioncserélő gyantát tartalmaz; az oszlopon átfolyó folyadékot kiselejtezzük. A gyantát előbb 2,5 liter vízzel, majd 2,5 liter 80:20 térfogatarányú metanol-víz eleggyel mossuk. Az antibiotikumot azután 10 liter oly 80:20 térfogatarányú metanolvíz eleggyel eluáljuk, amely 7,5 g/liter káliumkloridot is tartalmaz. Az eluátumot csökkentett (20 mm Hg-oszlop) nyomás alatt 400 ml térfogatra pároljuk be 40 C° alatti hőmérsékleten. Az így kapott koncentrátumot regenerált cellulóz diafragma alkalmazásával desztillált víz-árammal szemben 24 óra hosSzat dializáljuk a szervetlen sók és különféle szerves szennyezések eltávolítása céljából. A dializált oldat az eluáturn teljes antibiotikum-aktivitását tartalmazza; térfogata 650 ml. Ezt az oldatot csökkentett (20 mm. Hg-oszlop) nyomás alatt 125 ml térfogatra pároljuk be. Az így kapott koncentrátumíhoz 20 térfogat 10:10:10 tf.-arányú éter-acetan-izopröpanol elegyet adunk, aminek hatására az antibiotikum kicsapódik. A levált antibiotikumot leszűrjük, acetonnal mossuk, majd 2 mm higanyoszlop .nyomás alatt 35 C° hőmérsékleten éjjelen át szárítjuk. Ilymódon 8,25 g terméket kapunk világosbarna színű por alakjában, amelynek antibiotikum-aktivitása 24 600 E/mg. 10
