152430. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Penicillium chrysogenum törzsek penicillin termelő aktivitásának megőrzésére, valamint a penicillin hozam fokozására

152430 zor mennyiségének csökkentése és az adagok számának szaporítása tehát nem alkalmas. Adott Penicillium törzsből történő oltóspóra készítésekor, a törzsnek szilárd-táptalajon, majd a rizs táptalajon való tenyésztése során a spontán variáció miatt számos, az anyakultúrától eltérő tulajdonságú egyed szaporodhat el. Ezek között találhatók rosszul, vagy egyáltalán nem spórázó, az anyakultúránál kisebb termelőképességű telepek. Ezen telepek fehér színűek, emiatt szilárd táptalajon morfológiailag jól elkülöníthetők a jő termelőképességű, spórázó zöld színű telepektől. A fehér színű alacsony termelőképességű vagy éppenséggel inprodúktív telepek prekurzorokkal szemben mutatott érzékenysége is nagyobb az anyakultúrában tapasztalt érzékenységnél. Az ilyen tulajdonsággal rendelkező, fehér telepek száma, amennyiben a kultúrát nem tisztítjuk még tőle (js ez a tisztítás eddig kizárólag a szilárd táptalajon történő szélesztések esetében volt lehetséges, a rizs táptalajon . történő oltóspóra készítésénél már nem), az oltóanyag készítésénél csak növekszik, ez á penicillint termelő fázis hozamára kedvezőtlen hatást gya-"• korol. " Jelen eljárásunk célja olyan Penicillium kultúrák előállítása, melyekben a prékurzor iránt érzékeny egyedek száma minimális. E feltétel megvalósítása következtében lehetővé válik a prékurzor koncentrációjának állandó, magas szinten való tartása a tenyészlében, mely a nagy penicillin hozam egyik előfeltétele. Technológiai szempontból pedig további előny mutatkozik a prékurzor nagyobb mennyiségben, kevés, esetleg egy adagban történő bevitelével, minthogy így a tenyészet befertőződésének veszélye nagy mértékben csökken. Eljárásunk kidolgozásához az a meglepő felismerés vezetett, hogy ha egy Penicillium törzset viszonylag nagy koncentrációjú fenilecetsav, vagy fenoxiecetsav tartalmú táptalajon szélesztettünk, az így nyert telepek- összességéből oltóspórát készítettünk és az oltóspórákat penicillin biószintéziséhez szükséges folyékony táptalajon, prékurzor jelenlétében neveltük, az ilyen tenyészetek penicillin hozama', más, hasonló • eljárással nem kezelt tenyészetek -hozamához viszonyítottan megnövekedett. További javulást értünk el, ha a toxikus koncentrációjú prékurzor jelenlétében történő tenyésztést' az oltóanyag készítés minden lépésére kiterjesztettük. Eljárásunk lényege szerint, az oltóspóra előállításához szükséges valamennyi generatív lépés során olyan mennyiségű fenilecetsavat, vagy fenoxieoetsavat oldunk a tenyészközegben, amennyi a kérdéses prékurzor koncentrációjának magasan a prekurzorral szemben érzékeny egyedek számára toxikus szint feletti értékeken való tartásához szükséges. Ekkor csupán azok az egyedek nőnek ki, melyek prékurzor iránti érzékenysége kicsiny, míg a fenilecetsavra, vagy fenoxiecetsavra érzékeny és általában 'kis termelőképességű, rosszul spórázó telepeket fej-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 lesztő spórák csírázását meggátoljuk. Ezen eljárás segítségével, a fokozott fenilecetsav, vagy fenoxiecetsav érzékenységgel rendelkező telepek leválaszthatók A találmány szerinti eljárásnak az oltóanyag készítés valamennyi generatív i(spóraképző) fázisában való alkalmazása következtében a vegetatív (pl. az inokulum), majd a termelő fázisba kerülő gombafonalak a legkisebb mértékben tartalmazzák az alacsony termelőképességű, prékurzor érzékeny .(improduktív) egyedeket. Egyegy aerob, mélykulturás tenyészet antibiotikum hozama már az improduktív fonalak hiánya következtében is megnövekedhet. Találmányunk szerinti eljárás megszünteti az eddigi oltóspóra készítési eljárások során fellépő, az előre nem látható variációk következményeként jelentkező rendellenességeket. Jelen eljárásunk teszi lehetővé, hogy Penicillium törzsekből tekintet nélkül azok változékonyságának mértékére, irányítottan tudjunk tömeg tenyésztésre alkalmas, nagy antibiotikum hozammal rendelkező, prekurzor-tűrő, spórás oltóanyagot előállítani. 1. példa: Penicillium chrysogenum DAD—1 törzs spóráit az alábbi összetételű szilárd táptalajon szélesztettükő glicerin 0,92%, szaharóz 1,0%, NaCl 4,0%, élesztő szuszpenzió 5,0%, agar-agar 2,0% (pH 7,4). A szilárd táptalaj a fenti komponenseken kívül növekvő koncentrációban a fenoxiecetsav nátriumsóját tartalmazta az alábbi séma szerint: 1,0%, 2,0%, 3,0%, 4,0%, 5,0%, 6,0%, 7,0%, 8,0%, 9,0%. A kontroll vizsgálatokhoz fenoxiecetsav nátriumsót nem tartalmazó táptalajt használtunk. A kérdéses Penicillium törzs spóráit olyan hígításban szélesztettük a szilárd táptalaj felületére,- hogy a kinövekvő telepek száma 100 körül, legyen, ami lehetővé tette a telepek egymástól való elkülönítését A tenyésztést 20 napon át, 25 C° hőmérsékleten végeztük. Ezen idő .alatt kinőtt telepek száma, .valamint^ a fehér színű1 ^improduktív) és a zöld színű (produktív) telepek közötti megoszlás az alábbiak szerint alakult:'. '.:-••' :••&•••••' Nincs fenoxiecetsav •Na 1,0% FEO-HNa 2,0% FEO-^Na 3,0% FEO—Na 4,0% FEO—Na 5,0% FEO—Na 6,0% FEO—Na •7,0% FEO—'Na 8,0% FEO—Na 9,0% FEO—Na kinőtt összes telep fehér telep zöld telep spórázási ideje 96 68 63 55 45 20 19 11 3 nincs növ. 18 12 nap alatt 5 2 2 1 0 0 0 0 12 nap alatt 12 nap alatt 14 nap alatt 20 nap alatt 20 napon túl 20 napon túl 20 napon túl nincs spórázás