152430. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Penicillium chrysogenum törzsek penicillin termelő aktivitásának megőrzésére, valamint a penicillin hozam fokozására
152430 ft jQjí napos inkubáció után 2,0% fenoxiecetsav ^riátriumsóját- tartalmazó szilárd táptalajon nőtt telepeik spóráit desztillált, sterilizált 0,02% í^rWiEJEIN 80-a.t és 4,8% íenoxiecetsav nátriumf's6t tartalmazó vízzel lemostuk.: Az így kapott 5 ': fenoxiecetsav nátrium sós spóraszuszpenzió 6 jnl-jét 500 ml-s Erlermieyer-lombikban előzőleg ,'autoklávban; 1,4 atü-n, 120 percig sterilizált 30 (Jg;hántolt rizsre oltottuk. A standard oltóspóra Celőáliítását 25 C° hőmérsékleten 7 napos iriku- 10 fbálással végeztük. Ez idő alatt a rizs szemek- • jj-ben kinőtt nükroorganizmus mintegy 3,109 spótrát - képzett. A kontroll oltóspóra készítéséhez : egy, a fenoxiecetsavat nem tartalmazó szilárd •táptalajon nőtt, izolált telep spóráit szuszpen- 15 •'dáituk desztillált, sterilizált és 0,02% TWEEN-80-at tartalmazó vízben, majd e szuszpenzió 6 ml-jét passzáltuk a leírt módon készített rizs szemekre. Az így készített oltóspóra szolgált a továbbiakban kontrollként. 20 Mind a fenoxiecetsavväl kezelt, mind a kontroll oltóspórákból rázott előtenyészeteket állítottunk elő az alábbi módon:' 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba 50 ml desztillált vízben oldot.tuk fel a kristálycukor 1,8%, a kukoricalekvár 25 3,5% és a CaCo3 0,5% mennyiségét. A táptalaj pH-ját 4,9-re állítottuk be. Sterilezés után 50 ml táptalajban 2,108 spórát oltottunk. A tenyészeteket 25 C°-on, 46 0 mm 'kitérésű rázóasztalon, 290 r/min fordulattal spórák csírázási 30 ideje és a kinőtt fonalak szaporodása a kontroll oltóspórával oltott" tenyészetéhez viszonyítottan mintegy 40%-kal jobb volt: •-5 Az előtenyészet 500 ml-jét 6 liter, előzőleg 35 autoklávban, 1,4 atü-n, 90 percig sterilizált táp.talajba oltottuk be, melynek összetétele az alábbi volt: laktóz 3,5%, kukoricalekvár 2,0%, psrH4 ) 2 S04 0,6%; pH 4,9. A tenyészetet az oltás ^útán 25 C°-on inkubáltuk, steril levegővel 1—1 40 arányban levegőztettük és 690 r/min. fordulatszámmal kevertettük. A tenyésztés 24. órájától jJcezdve a tenyészléhez a fenoxiecetsav nátriumiójának olyan mennyiségét adagoltuk, hogy angíak koncentrációja a - tenyészlében mindenkor 45 fj.600 ug/ml legyen> A kontroll fermentáció oltá-P-íra., fenoxiecetsavväl előzőleg nem kezelt spórá-Kal. oltott rázott előtenyészetet használtunk. RAz első prekurzor adagolást követő 2—10 óra gnülva a fenoxieoetsawáli'eddig nein- kezelt 50 ||iiyészet konzisztenciája híg lett, a fonalak •mikroszkópi képe mintegy 25%-os autolízist futatott. Ugyanakkor a fenoxiecetsavväl már előzőleg kezelt spórákkal oltott tenyészlevekben az autolízis mértéke a prekurzor adagolása után 55 fc-50 /o-os volt. A 30. órában vett minták elemzése 'szerint a tenyészetek szárazanyag tartalma: kontroll: 0,22% fenoxiecetsavväl előzőleg kezelt: 0,36%. A prekurzorral kezelt tenyészetek pH-jának ingadozása is csekély volt. A tenyésztés QQ ;140. órájában vett mintában a V-penicillin koncentrációja az alábbiak szerint alakult (8 párhuzamos kísérlet átlaga): kontroll: 8098 NE/ml, .íenoxiecetsawal kezelt spórával oltott tenyészet: 9505 NE/ml. 65 2. példa: Az 1. példában leírt módon, szilárd táptalajon szélesztettük a PeniáUium chrysogenum Cs—1 jelű törzset. A standard tenyésztési körülmények során a 2,0% fenoxiecetsavas-nátríumsót tartalmazó táptalajon kinőtt összes telepek közül a fehér telepek l,0%j ban fordultak elő, amíg ugyanez az érték fenoxiecetsavas nátriumsót nem tartalmazó szilárd táptalajon nőtt telepeknél 5,6%-nak adódott. ; A továbbiakban az 1. példában részletezett módon készítettünk rizskultúrát, rázott élőtenyészetet és fermentációt. A 6 literes tenyészetek 140. órában vett mintáiban a V-penicillin koncentrációja az alábbiak szerint alakult (4 párhuzamos kísérlet adata): kontroll; 5025 NE/ml, fenoxiecetsav nátriumsóval előzőleg kezelt tenyészet: 6112 NE/ml. 3. példa: Penicillium chrysogenum DAD-—1 törzset olyan szilárd táptalajon szélesztettük, melyben a fenileoetsav nátriumsóját növekvő koncentrácibóan oldottuk fel. A fenilecetsav nátriumsó koncentrációi az egyes táptalajokban az alábbiak voltak: 0,2"/o, 0,4%, 0,6%, 0,8%, 1,0%, 1,4%, 1,8%, 2,2%, 2,6%. Kontrollként olyan táptalajt alkalmaztunk, melybe fenilecetsav nátriumsót nem tettünk. A szilárd táptalaj összetételét az 1. példában részleteztük. A standard tenyésztési körülmények során kifejlődött telepek száma és a fehér, ill. zöld telepek aránya az alábbiak szerint alakult: összes Fehér telep telep szám szám Zöld telepek spórázása Kontroll nincs FES—JSTa 106 0,2% FES--Na ; - 60 0,4% FES—Na 41 0,6%. FES—Na 44 0,8% FÉS—Na- 32" 1,0% FES--Na V 20 l,40/0 FES—Na 11 1,8% FES—Na " 2 2.2% FES-Jtfa-': . 4 2,6% FES—Na 0 21 10 nap alatt 11 12 nap alatt 2 19 nap alatt' 3 22 nap alatt 1 alig látható spórázás • — spórázás nincs — spórázás nincs — spórázás nincs — spórázás nincs — spórázás nincs A 0,4% FES-^Na sót tartalmazó és a fenilecetsav Na sót nem tartalmazó szilárd táptalajokról lemosott spórákkal az 1. példában említett módon, rizs szemeken egy-egy oltóanyag sorozatot készítettünk, melyekkel az 1. példában említett módon rázott előtenyészeteket állítottunk elő. A rázott előtenyészeteket az 1. példában részletesen leírt arányok szerint 1,4 atü-n, 30 percig sterilezett fermentációs táptalajba oltottuk be, melyben 0,1% fenilecetsav nátriumsó is volt oldva. A tenyésztést 500 ml-s Erlenmeyerben 25 C°-on 245 r/min. sebeséggel végeztük rázóasztalon, melynek kitérése 46 mm
