152235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozott és elnyújtott hatású injektálható ACTH készítmények előállítására
152235 ID sával az alábbi összetételű szuszpenziót állítottuk elő: 19-peptid (45 USP E/mg) cink (cinkacetát alakjában hozzáadva) Na2 HPO é benzilalkohol nátriumklorid pH 40 USP E/ml, 2 mg/ml, 0,66 mg/ml, 10 mg/ml, 9,2 mg/ml, 8,0. Ez a készítmény az elnyújtott aktivitás vizsgálatára szolgáló kísérlet során 100 mg mellékvesére számítva 293 meg értéket adott. 7. példa: Az 1. példában leírthoz hasonló módon eljárva, ACTH-aktivitású 20-peptid felhasználásával az alábbi összetételű szuszpenziót állítót- 20 tuk elő: kai nagyobb mértékben elnyújtott hatással rendelkezik. 5 8. példa: 14,8 mg AGTH aktivitású szintetikus 24-peptidet, amelynek hatás-erőssége 101 USP E/mg, feloldunk 5 ml savas vízben (pH 3,0). Ehhez az oldathoz 4,7 ml oly cinkklorid oldatot adunk, amely 21,4 mg/ml cinket tartalmaz. Az elegy össztérfogatát vízzel 20 ml-re egészítjük ki. Az így kapott oldathoz hozzáadunk 20 ml oly oldatot, amely 12,5 mg/ml fenolt és 15 mg/ml nátriumkloridot tartalmaz. Az elegy pH-értékét 4,8 ml 0,5 n nátriumhidroxid oldat (karbonátmentes) keverfs közben, percenként történő hozzáadása útján 7,6-ra állítjuk be. Az elegyet azután vízzel 50 ml-re töltjük fel. Az ily módon elkészített szuszpenzió összetétele az alábbi: 10 15 20-peptid (73 USP E/mg) 60 USP E/ml, cink (cinkszulfát alakjában 24-peptid 40 USP E/ml, hozzáadva) 3 mg/ml, £5 cink 2 mg Zn/ml, Na2 HP0 4 1,0 mg/ml, fenol 5 mg/ml, benzilalkohol 10 mg/ml, nátriumklorid 8,8 mg/ml, nátriumklorid 9,3 mg/ml, pH 7,6. pH 7,8. Ez a készítmény az elnyújtott aktivitás vizsgálatára szolgáló aszkorbinsav-elfogyasztási kísérlet során 100 mg mellékvesére számítva 312 meg értéket adott. Ezt a készítményt klinikai kipróbálásnak is alávetettük 7 betegen, 60 USP E adagban. Beadás után 4 óránként meghatároztuk a vérben az eozinofil-számot; mindegyik beteg esetében kiszámítottuk az eozinofil %-értéket és a kapott értékek alapján átlagértéket határoztunk meg. Az eozinofil-szám csökkenése" és a vérképnek a kísérlet elején mutatott értékhez való visszatérése alapján következtetni lehet a készítmény elnyújtott hatására. A fenti kísérlet során az alábbi átlagos eozinofil-értékeket kaptuk: 30 35 Ebben a készítményben a cink főként egy ZnCl2 • xZn(OH)2 képletű bázisos só alakjában van jelen. Ez a készítmény az elnyújtott hatás kimutatására szolgáló aszkorbinsav-elfogyasztási kísérlet során 100 mg mellékvesére számítva 267 meg értéket adott. 40 9. példa: Az 1. példában leírthoz hasonló módon eljárva, ACTH-aktivitású 24-peptid felhasználásával az alábbi összetételű szuszpenziót állítot-45 tuk elő: Az injekció után eltelt idő, óra: Ö* 4 8 12 16 20 24 Eozinofil átlagérték: 100 91 43 38 36 84 102 Egy hasonló összetételű, de csupán a szokásos kereskedelmi minőségű ACTH azonos mennyiségét tartalmazó készítmény az alábbi eozinofil-reakciót adta: Az injekció után eltelt idő, óra: 0 4 8 12 16 20 24 Eozinofil átlagérték: 100 50 25 50 87 102 101 A fenti táblázatok adatai világosan mutatják, hogy a találmány szerinti készítmény sokso 95 60 as 24-peptid (101 USP E/mg) cink Na2 HP0 4 benzilalkohol pH 30 USP E/ml, 1,75 mg/ml, 0,58 mg/ml, 10 mg/ml, 8,0. Ez a készítmény az aszkorbinsav-elfogyasztási kísérlet során 100 mg mellékvesére számítva 287 meg értéket adott. Ezt a készítményt klinikailag is kipróbáltuk 7 betegen, 60 USP E adagokban. C. C. Porter és R. H. Silber (J. Biol. Chem. 185, 201, 1950.) módszere szerint meghatároztuk 4 egymást követő napon keresztül a vizelettel 24 óra alatt kiválasztott 17—OH kortiköid mennyiségét. A kapott eredményeket mg/24 óra értékekben az alábbi táblázatban foglaltuk össze:
