152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
152ÖÍÍÍ) szuszpenziót). Éjszakán át hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd egymást követően 5%-os nátriuzn-hidrokarbonaí oldatta], vízzel. 1 n sósav oldattal, vízzel mossuk, szárítjuk és bcpároljuk. Bepárlás után 4G g (90%) dipeptid-észtert kapunk olaj tormájában (XVIII), A fenti olajat 110 ml metanolban oldjuk és só-jég hűtés mellett ammóniagázzal telítjük, majd 4 napon át ledugaszolva szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután fél óra hosszat forraljuk, majd szárazra pároljuk. A párlási maradékot 250 ml 96%-os etanolban forrón feloldjuk és jégszekrényben hagyjuk kristályosodni. A kivált kristályokat szűrjük és hideg etanollal mossuk, szárítjuk. 17,8 g (40%) védett dipeptid-amidot kapunk. Op.: 206—207 C°. (a) D =—34,1 (c=l, metanolban). A kristályosítási anyalúgot bepárolva 50 ml metanolban újra oldjuk és az amidálást megismételjük, amikor további 10 g (22%) hasonló minőségű 'védett dipeptidamidhoz jutunk (XVIIIb). Analízis: C19 1Í 29 0 4 N 3 S (395,51); számított: C 57,7, II 7,3, N 10,8, S 8,1; talált: C 57,9, H 7,5, N 10,7, S 8,0. H-Leu-Met-NH2 • HCl (XVIIIb) előállítása. Kb. 80 ml nátriumról desztillált vízmentes ammóniában feloldunk 5,05 g (11,75 mmól) védett dipeptid-amidot (XVIIIa) és fém nátriumot adunk hozzá a tartós kék szín megjelenéséig (kb. 0,58 g szükséges), majd 2,14 g ammónium-klorid hozzáadása után az ammóniát elűzzük vákuumban való keveréssel. A maradékot kénsav mellett exikkátorban szárítjuk. A száraz maradékot vízben oldjuk, sósavval pH ' 3-ra állítva a nem oldódó részt kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A maradékot 20 ml vízmentes etanol és kloroform 1 : 1 arányú el egy ével eldörzsöljük, szűrjük, majd a kiszűrt sókat még 3X20 ml fenti eleggyel mossuk. Az oldatokat bepároljuk és a kristályos maradékot izopropanolból átkristályosítjuk.. 2,7 g (77%) dipeptid-amid-klórhidrátot kapunk. Op.: 85—87 C°-on megolvad. («D °==+7,3 (c = 2, vízben). Analízis: C11 H, 4 0 2 N,SC1 • 2,5 H2 0 (342,89); számított: C 38,60, H 8,50, N 12,25, S 9,35, Cl 10,5; talált: C 38,55, H 8,20, N 12,35, S 9,70, Cl 10,3. H-Pvr-Pro-Ser-Lys(BOC)~Asp(OBu0-Ala-Phe~Ile-Gly-Leu-Met-NH2 (XIX) előállítása. Feloldunk 0,42 g (0,34 mmól) Z-Pyr-Pro-Ser-Lys(BOC)-Asp(OBu0-Ala-Phe-Ile-Gly-OH-t 15 ml dimetilformamidban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogenolizáljuk. A hidrogén felvétele után a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk, és vízzel eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 0,29 g (80%) nonapeptidet kapunk. Op.: 237—239 C°. Rf: 0,35, trifluorecetsavval kezelve 0,0. 0,2 g (0,181 mmól) nonapeptidet leöntünk 0,0254 ml (0,181 mmól) trietilamint tartalmazó 2,0 ml dimetilformamíddal és állni hagyjuk 10— 15 percig. Géllé alakul. A gélt —15 C°-ra hűtjük, majd keverés közben 0,018 ml (kb. 0,181 mmól) klórszénsav-etilésztert, adunk hozzá. A gcles anyaghoz kb. 15 perc múlva adjuk az amin-komponenst: 1,0 ml dinietilíormami.dban oldunk 0,08 g (0,234 mmól) L-leucil-L-metionin-amid-klórhidrátot és lehűtés után 0,032 ml (0,235 mmol) trietilamint adunk hozzá. A keletkező szuszpenziót egyszerre a vegyes savanhidridhez adjuk, majd 2X0,5 ml dimetilformamiddal bemossuk. A reakcióelegy továbbra is gél marad. Éjszakán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni, majd vízzel hígítjuk, eldörzsöljük, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 0,22 g (92%) <';-terc.butiloxi-karbonil-undekapeptid-/i-tere.butilészter-íf-arnidot kapunk. Op.: 233 C°. Rí: 0,8, trifluorecetsavval kezeive 0,3. Analízis: C63 H 10 iO l7 N 13 S (1344,61); számított: C 56,4, II 7,5, N 13,55; talált: C 56,5, H 7,4, N 13.60. 2. példa (lásd a 2. táblázatot: Z-Phe-Ile-OMe (XXI) előállítása. 6,5 g (21,6 mmól) karbobenzoxi-L-fenilalanint feloldunk 25 ml kloroformban és 3,02 ml (21,6 mmól) trietilamin hozzáadása után —10 C°-ra hűtjük, majd keverés közben 2,16 ml (kb. 21,6 mmól) klórszénsavetilésztert csepegtetünk be. Tíz perc keverés után. 25 ml kloroformban oldott 3,9 g (21,6 mmól) L-izoleucin-metilészter-klőrhidrátot (XX) és 3,02 ml (21,6 mmól) trietilamint adunk hozzá úgy, hogy a reakcióelegy hőmérséklete 0 C° alatt maradjon. Éjszakán át állni hagyjuk. Egymást követően vízzel, 5%-os nátriumkarbonáttal, vízzel, 1 n sósavval és vízzel mossuk, majd szárítjuk és bepároljuk. A párlási maradék kristályos védett dipeptidészter (kb. 100%). Metanol-víz elegyből átkristályosítva 7,4 g (80%) anyagot ka-80 punk. Op.: 103—104 C°. («) ^ = _ 11,8° (c=2, metanolban). Analízis: C24 H 30 O 5 N 2 (426,50); számított: C 67,5, H 7,1, N 6,60; talált: C 67,0, H 7,2, N 6,55. ~Z-Phe-Ile-N2 H 3 (XXIa) előállítása. Feloldunk 16 ml forró metanolban 7 g (16 mmól) védett dípeptidésztert (XXIa) és 10 ml 80%-os hidrazin-hidráttal 3 órán át visszafolyós hűtő alatt forraljuk. A kivált kristályos hidrazidot kb. 20 ml vízzel eldörzsölve szűrjük, hideg metanollal mossuk, szárítjuk. 6 g (80%) védett dipeptidhidrazidot (XXIb) kapunk. Op.: 218 C° (a) o = —13,85 C° (c = 2, dimetilformamidban). Analízis: C23 H 30 O 4 N 4 (426,50); számított: C 64,8, H 7,1, N 13,10; 65 talált: 64.5, H 7,1, N 12,90.
