152069. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív oligopeptidek előállítására
152069 15 18 Z-Phe-Ile-Gly-OEt (V) előállítása. Szobahőmérsékleten feloldunk 20 ml dimetilformamidban, mely 4,6 ml 5 n sósavat is tartalmaz 8,12 g (19 mmól) védett dipeptid-hidrazidot (XXIb), majd 0 C° alatt 4,6 ml 5 mólos nátrium-nitritet csepegtetünk be. Az azid azonnal kezd kiválni. Hűtés mellett 15 percig kevertetjük, majd 20 ml hűtött 15%-os konyhasó oldat hozzáadása után a szuszpenzióhoz 150 ml hűtött etilacetátot csurgatunk. Az azid feloldódik. Az etilacetátos részt elválasztjuk, a vizes fázist 50 ml etilacetáttal kivonjuk, majd az egyesített etilacetátos oldatokat 10%-os szóda oldattal és 15%-os konyhasóval mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk. Oldunk 20 ml dimetilformamidban 2,66 g (19 mmól) glicin-etilészter-klórhidrátot (I) és 2,66 ml (19 mmól) trietilamint adunk hozzá. A keletkező szuszpenzióhoz szűrjük az etilacetátban oldott azidot. Az egyesített oldatokból az etilacetát egy részét (kb. 100 ml-t) 30 C°-os fürdőről vákuumban ledesztilláljuk és szobahőfokon 24 órán át állni hagyjuk. Végül az összes etilacetátot ledesztilláljuk és a maradékot vízzel hígítjuk, a kivált anyagot szűrjük, szárítjuk, metanol-víz elegyből kristályosítjuk. így 6,65 g (70%) védett tripeptidésztert kapunk. (V). Op.: 168—169 C° 20 (a) D ——30,1 (c = 1, metanolban). Analízis: C27 H 35 Q 6 N 3 (497,57); számított: C 65,3, H 7,1, N 8,45; talált: C 65,2, H 7,3, N 8,30. Z-Pyr-Pro-Ser-OMe (XXIII) előállítása. 3,24 g (9,0 mmól) karbobenzoxi-L-piroglutamil-L-prolint (XIV) feloldunk 9,0 ml dimetilformamidban és 1,26 ml (9,0 mmól) trietilamin hozzáadása után —10 C° hőmérsékletre hűtve 0,9 ml (kb. mmól) klórszénsavetilésztert csepegtetünk hozzá. Kevertetjük 10 percig, majd 5,0 ml dimetilformamidban feloldott 1,26 ml (9,0 mmól) trietilamint és 1,41 g (9,0 mmól) L-szerin-metilészter-klórhidrátot (XXII) - csepegtetünk a vegyes savanhidridhez. Éjszakán át hagyjuk állni szobahőmérsékleten, a dimet.ilformamidot ledesztilláljuk, a maradékot oldjuk etüacetátban, mossuk citromsav oldattal, vízzel, nátriumbikarbonát oldattal, vízzel, szárítjuk, bepároljuk. A kristályos párlási maradékot etilacetátból átkristályosítva 2,7 g (65,0%) védett tripeptidésztert (XX) kapunk. Op.: 140—141 C°. ' Analízis: C22 H 27 0 8 N 3 (461,46): számított: C 57,3, H 5,9, N 9,1; talált: C 57,2, H 6,0, H 9,0. H-Pyr-Pro-Ser-N2 H 3 (XXIIIb) előállítása. 2,5 g (5,4 mmól) védett tripeptidésztert feloldunk 50,0 ml metanolban és csontszenes palládium jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogén felvétele után a katalizátort kiszűrjük, bep.ároljuk az oldatot. A maradék olaj L-piroglutamil-L-proiil-L-szerm-metilészter (XXIIIa). Eztaz olajat XXVa oldjuk 5,0 ml tere. butanolban és 0,44 ml 80%-os hidrazinhidrátot adunk hozzá. Szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A keletkező hidrazid kikristályosodik. Két nap után a kristályokat szűrjük, terc. butanollal és 96%os etanollal mossuk, szárítjuk. Kapunk 1,3 g (74%). Op.: 169 C*. Analízis: CK! H 21 O r ,N s (327,34); számított: C 47,6, H 6,45, N 21,4; talált: C 47,5, H 6,50, N 21,3. H-Pyr-Pro-Ser-Lys(BOC)-Asp(OBu'')-Ala-Phe-Ile-Gly-OH (XVa) előállítása. Feloldunk 3,0 ml dimetilformamidban 0,3 g (0,92 mól) fenti tripeptidhidrazidot (XXIIIb) és —20 C° alatt 0,42 ml 6 n sósavat és azután 0,19 ml 5 mólos nátriumnitritet adunk hozzá. Hagyjuk állni —20 C° hőmérsékleten 15 percig, majd az alábbi szuszpenzióhoz csepegtetjük — 20 C° hőmérsékleten: Szuszpendálunk 0,5 g (0,62 mmól) hexapeptidet (Xla) 2,0 ml dimetilformamid és 2,0 ml piridin elegyében, majd 0,43 ml (3,0 mmól) trietilamint adunk hozzá. Lehűtjük —20 C°-ra. Az azid beadagolása után egy óra hosszat ••—10 C° alatt kevertetjük, majd szobahőmérsékleten hagyjuk állni éjszakán át. Bepároljuk, 1 n citromsavval eldörzsölve szűrjük, citromsavval, vízzel mossuk, szárítjuk. Kapunk 0,51 g (75,5%) nonapeptidet (XVa). Op.: 239 C°. Rí: 0,35. 3. példa: a) Z-Phe-Ile-Gly-OH előállítása. Feloldunk 2,50 g (5 mmól) védett tripeptidésztert 10 ml metanol-dioxán (1 : 1) elegyben és 3,75 ml 4 n nátronlúgot adunk hozzá. Előbb kevés anyag (gél) kiválik, majd 3 óra után már tiszta oldat, melyet 15 ml 1 n sósavval savanyítunk és vízzel hígítva, hidegen eldörzsölve szűrünk, vízzel kimosunk. A gélszerű védett tripeptidet jól kinyomkodjuk, majd vákuumban szárítjuk. 1,92 g (84%) laza fehér port kapunk. Neutralizációs ekvivalens: 460 (469,5) (a) * = = —19,8 (c = 2, metanolban). b) Z-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH2 előállítása. Feloldunk 2,53 g (5 mmól) védett tripeptidet 10 ml dimetilformamidban 0,70 ml (5 mmól) trietilamint, majd —10 C°-on 0,5 ml (kb. 5 mmól) klórszénsav-etilésztert adunk hozzá. Tíz perc keverés után 0 C° alatt 6,5 ml dimetilformamidban szuszpendált, ill. oldott 2,22 g (6,5 mmól, 30% felesleg) dipeptídamidklórhidrátot és 0,91 ml (6,5 mmól) trietilamint csepegtetünk be, összesen 3 ml dimetilformamiddal beöblítjük. Éjszakán át hagyjuk állni, majd vízzel hígítjuk, szűrjük, vízzel mossuk, vákuumban szá-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
