151959. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitocin előállítására
11 C34 H 41 0 7 N 3 SC1 (671,21). Elm.: C 60,8; H 6,0; N 6,3; CI 5,3. Tal.: 61,2; 5,8; 6,7; 5,5. 11. példa: 15,5 g (23 mMöl) 10. példában leírt védett tripeptidésztert. 250 ml etanolban szuszpendálunk és 9,6 ml 74%-os hidrazin hidráttal elegyítve 2 órán keresztül 60°-on tartjuk, végül 500 ml vízzel hígítva 0°-ra hűtjük és a kivált csapadékot leszűrjük. Szárítás után 13,0 g (84%) védett tripeptidhidrazidot nyerünk, melynek op-ja: 254— 256°; «D=—16,0°; (c = l; jégecet); R/: 0,87. C33 H 40 O 6 N 5 SCl (671,20). Elm.: C 59,7; H 6,1; N 10,4; Cl 5,3. Tal.: 60,0; 6,1; 10,2; 5,0. A p-klórkarbobenzoxi-hexa és nonapeptid szintézise. (4—5. lépés.) 12. példa: 26,0 g (41 mMól) p-klórkarbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginü-S-benzil-L-ciszteinil hidrazidot 270 ml dimetilformamid és 10,4 ml 0,429 g/ml töménységű sósav 0°-os elegyében oldunk. Ezután az oldatot —20°-ra hűtjük és 2,82 g NaN02 3 ml víz és 27 ml dimetilformamidos oldatát csepegtetjük hozzá erőteljes keverés közben, majd ugyancsak —20°-on 17 ml trietilamint adunk hozzá. Az így elkészített azid oldatához 11,6 g L-propil-L-leucil-glicinamidot adunk, melyet előzőleg 250 ml dimetiliormamidban oldottunk. A reakcióelegyet ezután 16 óráig 40°-on tartjuk, a dimetilformamidot ledesztilláljuk és a maradékot vízzel eidörzsölve jutunk a nyers hexapeptidamidhoz, melynek súlya: 26,0 g (71,5%). További tisztítás céljából dimetilformamid-vízből átkristályosítható. Op.: 208—210°. C40 H 59 N 9 O 10 SCl (888,43). Elm.: C 54,0; H 6,1; N 14,2; Cl 4,0. Tal.: 53,2; 6,1; 14,2; 4,0. 13. példa: 7,8 g (11,6 mMól) p-klórkarbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucilhidrazidot 65 ml dimetilformamid és 2,42 ml 0,445 g/ml töménységű sósav 0°-os elegyében oldunk. Az oldatot —20°-ra hűtjük és 0,8 g NaNQ2 0,8 ml víz és 7,2 ml dimetilformamidos oldatát csepegtetjük hozzá erőteljes keverés közben. Ezután 20'-ig —10 C°-on tartjuk, majd újra —20 C°-ra hűtve 4,76 ml trietilaminnal az oldat pH-ját 8-ra állítjuk. Az így elkészített azid oldatához 8,25 g ' szabad hexapeptidamid 16,5 ml dimetilformamidos oldatát adjuk — melyet a 12. példában leírt védett hexapeptidamidból jégecetes HBral a 2. példában leírt módon nyerünk — és a reakcióelegyet 24 órán át 20 C°-on tartjuk. A dimetilformamid ledesztillálása után nyert géles csapadékot 66 ml vízzel eldolgozva szűrjük és szárítjuk. A nyers védett nonapeptidamid súlya 14,25 g (91.5%). Tisztítása céljából tízszeres 12 mennyiségű metanollal egy órán át forraljuk és többször mossuk metanollal. így 238—240 C° olvadáspontú S-benzil-N-p-klórkarbobenzoxi-L--ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-L-glutaminil-L-5 -aszpar aginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-L-leucilglicinamid nyerhető. aD =—53,4°; (c=2; dimetilformamid). CeóHssO^Ni S2 C1 (1358,01). Elm.: C 57,6; H 6,3; N 12,4; Cl 2,6. 10 Tal.: 57,2; 6,3; 11,7; 2,7. A védett nonapeptid átalakítása oxitocinná. (6. lépés.) 15 14. példa: 1,0 g 13. példában leírt védett nonapeptidamidot 100 ml teljesen száraz folyékony ammóniában oldunk és keverés közben, a levegő tel-20 jes kizárása mellett •— maradandó kék szín megjelenéséig — fém Na-t adagolunk az oldathoz. A fölös Na-ot kevés NH4 Cl-al távolítjuk el és az oldatot szárazra pároljuk. A visszamaradó amorf fehér port 1000 ml bideszt. vízben old-25 juk, híg ecetsavval pH-ját 6,5—7-re állítjuk és egy ekvivalens H2 0 2 hozzáadásával oxidáljuk. Az így nyert Oxitocin vizes oldatának egy milliliterében 180—200 NE Oxitocin van, izolált patkány uteruson mérve. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás Oxitocin előállítására azáltal jelless mezve, hogy kristályos p-klórkarbobenzoxi-L-leucint glicinetilészterrel kapcsolunk, a kapott dipeptidésztert védőcsoportjától megszabadítva p-klórkarbobenzoxi-L-prolinnal kapcsoljuk és a nyert védett tripeptidésztert ammonolízisnek 40 vetjük alá, ily módon a p-klórkarbobenzoxi csoport eltávolítása után a kristályos L-prolil-L-íeucil-glicinamidhoz jutunk, amelyet azután a p-klórkarbobenzoxi-L-glutaminil-L-aszparaginíil-S-benzil-ciszteinilhidrazid védett tripeptiddel 45 kapcsolunk; ez utóbbit úgy nyerjük, hogy p-klórkarbobenzoxi-L-aszparagint S-benzil-L-ciszteinmetilésztérrel kondenzálunk, majd a védőcsoport eltávolítása után a terméket p-klórkarbobenzoxi-L-glutaminnal kapcsoljuk és a 50 nyert védett tripeptidésztert hidrazinná alakítjuk; a fenti két tripeptid kapcsolása útján nyert védett hexapeptidamidot védőcsoportjának megszabadítása után a p-klórkarbobenzoxi-S-benzil-L-ciszteinil-L-tirozil-L-izoleucil-hidrazid N-ter-55 minális tripeptiddel kapcsoljuk, mely utóbbit úgy nyerjük, hogy S-benzil-N-p-klórkarbobenzoxi-L-ciszteint vagy ciánmetilészterét L-tirozinmetilészterrel kapcsolva a kapott védett dipeptidésztert hidraziddá alakítás után L-izoleucin-60 metilészterrel kondenzáljuk; a hexapeptidamid és a tripeptidhidrazid kapcsolása útján nyert védett nonapeptidamidot R—OH, (ahol R alkil vagy aralkil) általános képletű alkohollal forralva főbb szennyezéseitől, majd folyékony am-65 móniában védőcsoportjaitól megszabadítva hid-6
