151797. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacén-származékok biológiai átalakítására a tetraciklin-sorozatba tartozó antibiotikus hatású vegyületekké
il 151797 12 A 3. példában leírthoz hasonló módon dolgoztunk, az alábbi eltérésekkel. A részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, amelyek mindegyike 10,6 mg 4--dimetilamino-6-metil-pretetramidot tartalmazott, 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten. A fermentációs lé ezután lefolytatott elemzése során 58 mcg/ml 7-klór-tetracikIin jelenléte volt kimutatható. A pontosan ugyanilyen módon, de a 4-dirnetilamino-8~metil~pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében 7-klór-tetracik-Hn jelenléte nem volt kimutatható. 10. példa: A 7-klór-4-dimetilamino-pretetramid biológiai átalakítása 7-klór-6-dimetil-tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs felhasználásával. A Streptomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs ferde ágáros kultúrájáról a spórákat steril desztillált vízzel lemostuk és így egy ml-enként 60—80X106 spórát tartalmazó szuszpenziót készítettünk. Ebből a szuszpenzióból 0,33 ml mennyiséget használtunk fel egy kb. 20 cm-es kémcsőben elhelyezett, 8 ml térfogatú inokulumtáptalaj beoltására. Az inokulum-táptalaj elkészítése és az inkubáltatás az 1. példában leírttal pontosan egyező módon történik. Az így kapott S. aureofaciens inokulum-kultúrával az 1. példában leírt módon elkészített fermentációs táptalajt oltottunk be. A táptalajt sterilizálás után 25 ml-es adagokban 250 ml-es Erlenmeyerlombikokba vittük be és egy-egy lombikot a S. aureofaciens inokulum-kultúra 1 ml-es adagjaival oltottunk be. A fermentációt percenként 180 fordulatot végző forgó rázóberendezésben 24 óra hosszat folytattuk 25 C° hőmérsékleten, Ezután a fermentációs lé mindegyik adagját egy-egy oly lombikba vittük át, amely 10 mg 7-klór-4-dimetilamino-pretetramid 1 ml dimetilszulfoxiddal készített oldatát tartalmazta. A fermentációt a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 25 C° hőmérsékleten. A fermentációs termék ezután lefolytatott biológiai elemzése során 28 mcg/ml 7-klór-6-demetil-tetraciklin jelenléte volt kimutatható. A pontosan ugyanilyen módon, de 7-klór-4-dimetilamino-pretetramid elhagyásával végzett ellenőrző kísérlet során 7-klór-6-demetil-tetraciklin jelenléte a fermentációs termékben nem volt kimutatható. 11. példa: A 7-klór-4-dimetilamino-pretetramid biológiai átalakítása 7-klór-6-demetil-tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL 3014 törzs felhasználásával. A 10. példában leírthoz hasonló módon dolgoztunk, az alábbi eltérésekkel: A nem-klórozó Streptomyces aureofaciens NRRL 3014 törzs spóráit alkalmaztuk az NRRL 3013 törzs spórái helyett. A részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, ame-5 lyek 10 mg 7-klór-4-dimetilamino-pretetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml d'irnetilszulíoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten. 10 A fermentációs lé ezután lefolytatott elemzése során 31 mcg/ml 7-klór-6-demetil-tetraciklin jelenléte volt kimutatható. A pontosan ugyanilyen módon, de a 7-klór-4-dimetilamino-pretctranvid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kí-15 sérlet fermentáció termékében 7-klór-6~demetil-tetraciklin jelenléte nem volt kimutatható. 12. példa: 20 A 7-klór-4-dimetilamino-pretetramid biológiai átalakítása 7-klór-6-demetü-tetraciklinné Streptomyces aureofaciens NRRL B—2407 törzs felhasználásával. A 10. példában leírthoz hasonló módon dol-25 gozunk, az alábbi eltérésekkel: A Streptomyces aureofaciens NRRL B—2407 törzs spóráit alkalmaztuk az NRRL 3013 törzs spórái helyett. A lombikok, amelyekbe a részlegesen fermentált levet átvittük, 10,1 mg 30 7~klór-4-dimetilamino-pretetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmér-35 sékleten. A fermentációs termék ezután lefolytatott elemzése során 99 mcg/ml antibiotikumaktivitást találtunk, 7-klór-tetraciklinben számítva. Papírcsík-kromatográfiai módszerrel 7--klór-6-demetil-tetraciklin jelenléte volt kimu-40 tatható. A pontosan ugyanilyen módon, de a 7--kl.ór-4-dimetilamino-pretetramid elhagyásával . lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében a 7-klór-6-demetil-tetraciklin jelenléte , nem volt kimutatható. 45 13. példa: A 7-klór-4~dimetilamino-6-metil-pretetramid biológiai átalakítása 7-klór-tetraciklinné Strep-50 tomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs felhasználásával. A Streptomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs ferde agáron szaporított kultúrájáról a spórákat steril desztillált vízzel lemostuk és ily módon 55 egy 60—80X106 spórát ml-enként tartalmazó spóra-szuszpenziót készítettünk. E szuszpenzió 0,33 ml-es adagjával egy kb. 20 cm-es kémcsőben 8 ml alábbi összetételű táptalajt oltottunk be: 60 szacharóz 30 g ammóniumszulfát 2 g kalciumkarbonát 7 g kukoricalekvár 20 g 65 csapvízzel feltöltve 1000 ml-re. 6
