151797. lajstromszámú szabadalom • Eljárás naftacén-származékok biológiai átalakítására a tetraciklin-sorozatba tartozó antibiotikus hatású vegyületekké
151797 ír 14 Az így elkészített táptalajt beoltás előtt autoklávban 20 percig sterilizáltuk kb. 1 atm túlnyomás alatt. A kémcsőben levő beoltott táptalajt azután 24 óra hosszat inkubáltattuk 28 C° hőmérsékleten, egy percenként 116 lökettel mozgatott rázóasztalon. Az ily módon kapott Streptomyees aureofaciens inokulummal azután az alábbi összetételű táptalajt oltottuk be: (NH4 ) 2 S0 4 6,7 g CaCOs 9,0 g CoCl2 -8H 2 0 5,0 mg NH4 C1 2,0 g MnSO,, (70%-os technikai minőség) 0,10 g kukoricalekvár 25,0 g keményítő 52,5 g kukoricaliszt 14,5 0 CT csapvízzel fel toll ;ve 1000 ml-Az így elkészített táptalajt autoklávban 20 percig sterilizáltuk kb. 1 atm túlnyomás alatt, majd 25 ml-es adagokban 250 ml-es Erlenmeyer-lombikokba töltöttük és lombikonként 1,0 ml S. aureofaciens inokulum-kultúrával oltottuk be. A fermentációt 24 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten, percenként 180 fordulatot végző forgó rázóberendezésben. Ezután a fermentációs lé mindegyik adagját egy-egy oly lombikba vittük át, amely 9,5 mg 7-klór-4-dimetilamino-6~metil-pretetramidot tartalmazott 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. 14. példa: A 7-hidroxi-pretetramid biológiai átalakítása 7-hidroxi-6-demetil-tetraciklinné, Sí reptomyces aureofaciens NRRL 3013 törzs fölhasználásával. A 13. példában leírthoz hasonló módon jártunk el, az alábbi eltérésekkel: A részlegesen fermentált levet oly lombikokba vittük át, amelyek 3,95 mg 7-hidroxi-pretetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután további 96 óra hosszat folytattuk a forgó rázóberendezésben, 28 C° hőmérsékleten. A fermentációs lé ezután végzett elemzése során 2,8 meg/ml antibiotikum-aktivitást találtunk, 7-klór-tetraciklin alakjában számítva. Az ugyanilyen módon, de a 7-hidroxi-pretetramd elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében antibiotikum-aktivitás nem. volt kimutatható. 15. példa: . 4-dimetilamino-pretetramid átalakítása 6-demetil-tetraeiklinné. Fermentációt hajtunk végre az alábbi rnódon. A nem-klórozó Streptomyees aureofaciens ATCC (F—198—1) törzs ferde ágáros kultúrájáról a spórákat steril desztillált vízzel lemostuk és ily módon egy 60—80X106 spórát ml-enként tartalmazó spóra-szuszpenziót készítettünk. Ebből a szuszpenzióból 0,33 ml mennyiséget használtunk fel a kb. 20 cm-es kémcsőben elhelyezett 8 ml térfogatú, alábbi összetételű tápoldat beoltására: szacharóz ammóniumszulfát kalciumkarbonát kukoricalekvár 10 csapvízzel feltöltve 30 g 2 g 7 g 20 g 1000 ml-re. A tápközeget beoltás előtt autoklávban 20 percig sterilizálunk kb. 1 atm túlnj'omás alatt. A beoltott kémcsövet azután 24 óra hosszat in-15 kubáltattuk 28 C hőmérsékleten; ily módon nyertük a fermentációhoz felhasználásra kerülő Streptomyees aureofaciens inokulumot. A fermentációs közeget az alábbi összetételben készítettük el: 20 ammóniumszulfát 6,7 g kalciumkarbonát 9,0 g CoCl2 -6H 2 0 5,0 mg ammóniumklorid 2,0 g 25 mangánszulfát (70%-os technikai) 0,10 g kukoricalekvár 25,0 g keményítő 52,5 g kukoricaliszt 14,5 g csapvízzel feltöltve 1000 ml-re. 30 Ezt a közeget autoklávban 20 percig sterilizáltuk kb. 1 atm túlnyomás alatt, majd 25 ml-es adagokban 250 ml-es Erlenmeyer-lombikokba töltöttük és 1,0 ml-es S. aureofaciens inokulum-35 adagokkal oltottuk be. A fermentációt forgó rázóberendezésben 24 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten. Ezután a fermentációs lé mindegyik adagját külön-külön oly lombikokba vittük át, amelyek 10 mg 4-dimetilamino-pre-40 tetramidot tartalmaztak 10 mg magnéziumacetát és 1 ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A fermentációt azután a forgó rázóberendezésben további 96 óra hosszat folytattuk 28 C° hőmérsékleten. Az ezután végzett elem-45 zés során 6-demetil-tetraciklin jelenléte volt kimutatható a fermentációs lében. A pontosan ugyanilyen módon,' de a 4-dimetilamino-pretetramid elhagyásával lefolytatott ellenőrző kísérlet fermentációs termékében 6-demetil-tetracik-50 lin jelenléte nem volt kimutatható. ( 16. példa: 6-metil-4-dimetiIamino-pretetramid és átala-55 kítása tetraciklinné. E termék biológiai átalakítása a 15. példában leírthoz hasonló módon lefolytatásra kerülő fermentációval történik, az alábbi eltérésekkel: A részleges fermentáció lefolytatása után a 60 fermentációs levet külön-külön oly lombikokba visszük át, amelyek 10 mg 6-metil-4-dimetilamino-pretetramidot tartalmaznak, 10 mg magnéziumacetát és 1 - ml dimetilszulfoxid elegyében oldott állapotban. A továbbiakban azután a 65 fermentációt a 29. példában leírt módon foly-7
