151786. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
1 3 Fusarium equiseti (Corda) Sacc. Fusarium sambucinum Fuck. Fusarium scirpi Lamb, et Fautr. Fusarium anguioides Sherb. A Fusarium anguioides Sherb. egy törzsét a Northern Regional Research Laboratories (Peoria, Illionis, USA) intézetnél NRRL 3020 sz. alatt, a Fusarium sambucinum faj egy törzsét pedig az American Type Culture Collection (Washington D. C, USA) intézetnél ATCC 11 852 sz. alatt letétbe helyeztük. Az anguidin és/vagy monodezacetil-anguidin előállítására és kinyerésére szolgáló eljárás egyik alakja a találmány értelmében abból áll. hogy egy folyékony tápközeget valmaely erre alkalmas Fusaríum-törzs konidiumaival vagy mieéliumával beoltunk és a kultúrát 3—25 napig inkubáltatjuk. Amint a kultúrában az anguidin, ül. monodezacetil-anguidin maximális mennyisége már kimutatható, a fermentációs levet leszűrjük és/vagy centrifugáljuk és a szüredékből extrahálás és/vagy adszorpció útján az anguidint és/vagy monodezacetil-anguidint kinyerjük. Ipari méretekben történő termelés esetében az extrakció alkalmazása előnyösebb, minthogy kevesebb időt igényel és olcsóbb. Az extrahálás céljaira különösen a vízzel nem elegyedő szerves oldószerek, mint a klórozott szénhidrogének, pl. metilénklorid, etilénklorid, kloroform és hasonlók, továbbá alkoholok, pl. butanol, amilalkohol és hasonlók, zsírsavak alkilészterei, mint etilacetát, propilacetát, butilacetát, amilacetát és hasonlók, ketonok, mint metilizobutilketon, metilamilketon és hasonlók alkalmasak. A fermentációs lé kivonatát azután — előnyösen vákuumban — szárazra párolhatjuk be, amikor is nyers állapotban kapjuk az anguidint és/vagy monodezacetil-anguidint. Az így kapott, különböző antibiotikumokat tartalmazó nyers elegy alkotórészeire való szétbontását és az anguidin, ill. monodezacetil-anguidin tiszta állapotban való kinyerését célszerűen kromatográfiai módszerrel, ill. ellenáramú megosztással végezhetjük. Az így nyert anguidint, ül. származékait a találmány értelmében különféle kémiai eljárásokkal más származékokká alakíthatjuk át. így pl. az anguidint katalitikusan gerjesztett hidrogénnel dihidro-anguidinné hidrogénezhetjük és az anguidint, valamint dihidro-származékát szulfonsavak reakcióképes származékaival vagy pedig telített vagy telítetlen mono- vagy dikarbonsavak reakcióképes származékaival acilezhetjük. Az anguidin és az acü-anguidinek alkáli- vagy földalkáli-hidroxidok segítségével történő teljes hidrolízise esetén anguidolt, a vizes-metanolos káliumhidrogénkarbonát-oldattal történő részleges elszappanosítás esetén pedig monodezacetil-anguidint kapunk termékként. Az anguidolt szulfonsavak vagy telített vagy telítetlen mono- vagy dikarbonsavak reakcióképes származékai segítségével a megfelelő triacil-anguidolokká acilezhetjük. 1786 4 Az anguidin dihidro-anguidinné való hidrogénezése katalitikusan gerjesztett hidrogénnel történik. Katalizátorként a periódusos rendszer 8. csoportjába tartozó fémek, előnyösen platina 5 vagy palládium alkalmazhatók. A hidrogénezés szobahőfokon vagy felemelt hőmérsékleten, légköri vagy megnövelt nyomás alatt folytatható le. Az acilezés pl. oly módon történhet, hogy az anguidint vagy dihidro-származékát szulfon-10 savak vagy telített vagy telítetlen mono- vagy dikarbonsavak reakcióképes származékaival, előnyösen valamely bázisos katalizátor, pl. piridin jelenlétében acilezzük. Az anguidin anguidollá való elszappanosítása az alábbi módon le-15 hetséges: az anguidin alkoholos oldatát, előnyösen szobahőmérsékleten, vizes alkálihidroxidoldattal reagáltatjuk, a reakcióelegyet azután kationcserélő-oszlopon víz és alkohol elegyével eluáljuk és a terméket bepárlás után kroma-20 tográfiai úton tisztítjuk és elkülönítjük. Az anguidol acilezése is piridin jelenlétében, valamely savanhidrid segítségével végezhető. Az anguidint az alábbi adatok jellemzik: olvadáspontja (benzolból vagy benzol és heptán 25 elegyéből) 162—164 C°. Fajlagos forgatóképessége («)24 D = —27° (c = 1,28, kloroformban). A termék elemzési adatai a C19 H 2 60 7 képletnek megfelelően (molekulasúly: 366,41): számított értékek: C 62,28%, H7,15%, 0 30,57% 30 talált értékek: C 62,1 %>, H 7,1 %, 0 30,3 % A Rast módszere szerint (kámforral) végzett molekulasúlymeghatározás során a molekulasúlyra 359 volt a talált érték. Az antibiotikum sem nitrogént, sem ként nem tartalmaz, úgy-35 szintén halogéneket sem. Az alkoholban felvett ibolyántúli abszorpciós színkép 192,5 millimikronnál mutat végabszorpciót (log £ = 4,02). Az infravörös színkép (káliumbromidban) az alábbi értékeknél mutat sávokat: 3420, 2960, 1735, 40 1680, 1450—1438, 1370, 1250, 1170, 1110, 1090— 1078, 1048—1026, 990, 960, 920, 700 cm-1 (lásd az 1. ábrán). A kristályos antibiotikummal lefolytatott kémiai vizsgálatok azt mutatták, hogy az anguidin mikro^hidrogénezés esetén (pallá-45 diumos szén-katalizátorral, etanolban) 1,18 mól hidrogént vesz fel. A Zeissel módszere szerint végzett O-metil-meghatározás 0,0% értéket adott, az O-acetil-meghatározás (savas elszappanosítás) során pedig 27,3% eredményt kap-50 tunk. A Benedict, Fehling, Tollens és Miliőn szerinti reakciók, valamint a vaskloriddal és káliumpermanganáttal acetonban lefolytatott reakció negatív eredményt mutat. Az anguidin a brómot széntetrakloridos közegben lassan el-55 színteleníti. Az anguidin acetonban, etanolban, dioxánban, kloroformban, metilénkloridban, piridinben és toluolban oldódik, vízben, dietiléterben, diizopropiléterben, pentánban, hexánban és heptánban nehezen oldódik. G0 A monodezacetil-anguidin az alábbi adatokkal jellemezhető: a monodezacetil-anguidin éterből kristályosítható; olvadáspontja 164—167 C°. Fajlagos forgatóképessége (ai25 D = —25° (c = 0,48, kloroformban). Elemzési adatok a 65 C17 H 2 40 6 képlet alapján: 2
