151580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta4-3-keto-szteroidok előállítására mikrobiológiai úton
151580 nenolot és 100—100 ml szerves oldószert adagoltunk. A lombikban szerves oldószer: kloroform, és széntetraklorid 1 : 1 arányú elegye. B lombikban szerves oldószer: kloroform. C lombikban szerves oldószer: diklórmetán. D lombikban szerves oldószer: diklóretán. 8 órai rázatás után Reichstein-féle S-vegyület termelés a lombikokban: A jelű: 96%-os B jelű: 82%-os C jelű: 79%-os D jelű: 99%-QS 4. példa: A 3. példában leírt módon össze különböző oldószereket. hasonlítottunk Reichstein-féle S-vegyület asznált oldószer termelése 8 órai rá; után diklóretán 100 % triklóretilén 94 % benzol 86 % toluol 95 % monoklórbenzol 64 <y0 metilacetát 31,4% etilacetát 42,5% butilacetát 87,5% n-butilalkohol 5 % metilizobutilketon 66,5% etiléter 100 7o nitrometán 21 % 5. példa: Az 1. példában leírt módon előállított tenyészetekhez 20—20 mg metilandrosztendiolt adagoltunk 1—1 ml acetonban feloldva és a táblázatban megadott időtartamok után a tenyészeteket 2 X 0,5 térf. kloroformmai extraháltuk, majd az extraktumban meghatároztuk kvantitatív papírkromatográfiával a keletkezett metiltesztoszteron mennyiségét. Átalakítási idő Termelt metiltesztoszteron %-ban 4 óra 27% 8 óra 43% 12 óra 43%, 16 óra 59% 24 óra 74% 6. példa: Az 5. példában leírt módon jártunk el, azzal ä különbséggel, hogy a tenyészetekhez 20—20 mg dehidroepiandroszteront adagoltunk. Átalakítási idő 4 óra 8 óra 12 óra Termelt delta-4-andros tendion %-ban 49% 63% 62% 7. példa: Az 5. példában leírt módon jártunk el azzal 5 a különbséggel, hogy a tenyészetekhez 20—20 mg pregnenolone adagoltunk. 20 25 Átalakítási idő Termelt progeszteron %-ban 15% 13% 24% 60% Az 5. példában leírt módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy a tenyészetekhez 20—20 mg pregnadienolonacetátot adagoltunk. 10 4 óra 8 óra 12 óra 16 óra 15 8. példa: Átalakítási idő 4 óra 8 óra 12 óra Termelt zl6 -dehidro-progeszteron %-ban 8% 12% 49% 9. példa: Az 1. példában leírt módon nyert 100—100 30 ml Streptomyces K—451 tenyészethez 20—20 mg Reichstein-féle S-vegyületet adagoltunk acetát alakban. 8 órás inkubálás után a tenyészeteket 0,25 térf. diklóretánnal extraháltuk és a szerves fázis elválasztása után a micéliumot az 35 organikus oldószerrel telített saját ferment-levében felszuszpendáltuk. Az így nyert, 2 darab 100—100 ml-es adaptált tenyészethez 20—20 mg R-anyagot adagoltunk. Az A lombikot ilyen állapotban tettük vissza a rázóasztalra, a B 40 lombikhoz még 100 ml diklóretánt adagoltunk. 8 órai inkubálás után a kromogénes analízis szerint az A lombikban az R anyagra számított elméleti termelés 99,7%-ában keletkezett Rcichstein-S vegyület, a B lombikban ezzel 45 szemben csak 39%,-ban. 10. példa: Az 1. példában leírt módon nyert 100—100 50 ml Streptomyces K—451-tenyészetekből 3 X 200 ml-t lecentrifugáltunk és a micéliumot steril vízzel 200—200 ml-re feltöltve felszuszpendáltuk. Az A és B jelű 200 ml szuszpenzióhoz 10 mg Reichstein-S-acetátot adagoltunk, majd 12 55 órai inkubálás után az A jelű lombikban megmértük a Reichstein-féle S-vegyület mennyiségét papírkromatográfiás módszerrel és azt 6,8 mg-nak találtuk. A B és a kezeletlen C szuszpenzió pH-ját 8,5-re állítottuk 2 n Na3 P0 4 -60 tal. Mindkét szuszpenziőhoz 4,4 ml diklóretánt adtunk, ez az oldószermennyiség szükséges ahhoz, hogy a vizes fázis telítve legyen ezzel a szerves oldószerrel. Mindkettőhöz 40 mg R-anyagot adagoltunk. 16 órás 28 C°-on történő 65 rázatás után a tenyészeteket kiextraháltuk 4
