151462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes hatású antibiotikum előállítására

31 . Másrészről a „D." elegyet előbb 3 liter, majd 1,5 liter metilénkloriddal extraháljuk. A metilénkloridos kivonatokat és a „C". elegyet egyesítjük és az elegyet csökkentett nyomás alatt 800 ml térfogatra pároljuk be. A koncentrá- 3 tumot 400 ml vízzel mossuk, majd újból bepároljuk 700 ml térfogatig. A kapott koncentrátumhoz azután 1 liter hexánt adunk, a képződött csapadékot leszűrjük, mossuk és csökkentett nyomás alatt 30 C° hőmérsékleten megszá- 10 rítjuk. Ily módon 3,7 g termék-frakciót ("F2

" frakció) kapunk, amely főként a 13.213 R.P. és 13.330 R.P. antibiotikumokat tartalmazza. 6. példa: ' 15 A fent említett F±

frakciónak megfelelő termék 10 g mennyiségét 200 ml oly rendszerben oldjuk, amely etilacetát, metanol és M/15 foszfát-tompító (5,5 pH-értékű) 8:3:5 tf. arányú 20 elegyéből áll, majd ezt az oldatot Craig-készúlékben ellenáramú megosztásnak vetjük alá, 50 cellás készüléket és 110 átvitelt alkalmazva (50 átvitellel a készülékben és 60 átvitellel az ún. „single withdrawal" módszer szerint), a 25 műveletet a két első cellában megkezdve. A felső fázisok elegyét a 0—37. cellákból (3,8 liter) elkülönítjük' és 300 ml térfogatra pároljuk be. Az így kapott koncentrátumot és a 0—37. cellákból vett alsó fázisok elegyét (3,8 liter) az- 30 után egyesítjük és az egészet 800 ml térfogatra. pároljuk be. A koncentrátum pH-értékét 180 ml n nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával. 8-ra állítjuk be és a kapott oldatot előbb 800 ml, majd 400 ml kloroformmal extraháljuk. A 35 kloroformos kivonatokat egyesítve 400 ml térfogatra pároljuk be és ezt a koncentrátumot. 400 nil 8 pH-értékre lúgosított vízzel mossuk. A mosási anyalúgokat 200 ml kloroformmal extraháljuk. A mosott koncentrátumot és a 40 mosófolyadékok kloroformos kivonatait egyesítjük és az elegyet 400 ml térfogatra pároljuk be, majd 400 ml 8 pH-értékre lúgosított vízzel mossuk, azután tovább pároljuk be 100 ml térfogatig, a koncentrátumhoz 200 ml buta- 45 nolt adunk és az elegyet újból bepároljuk 100 ml térfogatra. Az így kapott butanolos oldat pH-értékét 30 ml n sósavoldattal telített butanol hozzáadásával 3,5-re állítjuk, majd 12 óra hosszai 4 C° hőmérsékleten tartjuk. Az ennek 50 során képződött kristályos terméket leszűrjük, mossuk és megszárítjuk; ily módon első generációként 4,55 g mennyiségben kapjuk a nyers 13.057 R.P. antibiotikum hidrokloridját. A kristályosítási anyalúg 100 ml térfogatra való* be- 55 párlása és 1 liter hexán hozzáadása után a képződött szilárd terméket leszűrjük, mossuk és megszárítjuk; így második generációként 2,5 g mennyiségben kapjuk a nyers 13.057 R.P. antibiotikum hidrokloridját. 60 7. példa: A nyers 13.057 R.P. antibiotikum fent (1. 6. példa) leírt módon nyert 3,75 g hidrokloridját 65 32 40 ml 20% vizet tartalmazó dioxánban oldjuk. Az oldatot leszűrjük, majd 2 óra alatt 15 ml vízmentes dioxánt, azután 30 perc alatt további 235 ml vízmentes dioxánt adunk hozzá. Kristályos termék válik le, ezt elkülönítjük, mossuk és megszárítjuk. Ily módon 2,75 g mennyiségben kapjuk a 13.057 R.P. antibiotikum hidrokloridját, amely narancsvörös , tűkristályokat képez, 225—230 C°-on bomlás közben olvad és antibiotikum-aktivitása 151 E/mg. 0,208 g fenti terméket 200 ml víz és 150 ml butanol elegyében oldunk. Azután 3,4 ml 0,1 n nátriumhidroxid-oldatot adunk hozzá, dekantálással szétválasztjuk a fázisokat, majd a vizes fázist 50 ml butanollal extraháljuk. A butanolos kivonatokat egyesítjük, 2 X 100 ml 8 pH-értékre lúgosított vízzel mossuk és 10 ml térfogatra bepároljuk. Az így kapott koncentrátumot 50 ml hexánnal kezeljük, a kapott csapadékot leszűrjük, mossuk és megszárítjuk. Ily módon 0,0945 g 13.057 R.P. antibiotikumot kapunk amorf vörös por alakjában, amelynek hatóanyagtartalma 160 E/mg. 8. példa: Az 5. példában leírt módon kapott F2

frakciónak megfelelő 5 g terméket 200 ml oly oldószer-rendszerben oldjuk, amely etilacetát, metanol és 5,5 pH-értékű M/15 foszfáttompítóoldat 8:3:5 arányú (térfogatra számítva) elegyéből áll. Az oldatot ezután ellenáramú megosztásnak vetjük alá, a 6. példában leírt készülékben. A 36—89. cellából elkülönített felső fázisok elegyét (5,3 liter) 500 ml térfogatra töményítjük be. Az így kapott koncentrátumot azután egyesítjük a 36—89. cellából elkülönített alsó fázisok elegyével (5,3 liter) és az egészet 800 ml térfogatra töményítjük be. Ezt a koncentrátumot 2 X 800 ml metilénkloriddal, majd ezt követően 800 ml kloroformmal extraháljuk. A kapott kivonatokat egyesítjük, 400 ml térfogatra bepároljuk, 2X400 ml 7,5 pH-értékrev beállított vízzel^ mossuk, végül pedig 10 ml térfogatra bepároljuk. 100 ml hexán hozzáadása után leválik a termék; ezt leszűrjük, mossuk és csökkentett nyomás alatt szárítjuk; ily módon 1,1 g 13.213 R.P. antibiotikumot kapunk, narancsvörös amorf por alakjában, amelynek antibiotikum-aktivitása 2650 E/mg. 9, példa: A 2. példában leírt módon kapott 500 liter fermentációs levet a 3. példában leírt módon kezelünk. Ily módon 8,5 g nyers 9.865 R.P. antibiotikumot kapunk, amelynek antibiotikum-aktivitása 395 E/mg. 17 g fenti módon kapott nyers terméket a 4. példában leírt módon tisztítunk, csupán azzal az eltéréssel, hogy metilénklorid helyett etilacetátot használunk. Ily módon 3 g 9.865 R.P. antibiotikumot kapunk, amelynek antibiotikumaktivitása 1300 E/mg. 16