151462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákellenes hatású antibiotikum előállítására

33 10. példa: A 9. példában leírt eljárással kapott 12,4 g 9.865 R.P. antibiotikumot butanolból és 7,35 pH-értékű M/3 foszfát-tompítóból álló rend- 5 szerben ellenáramú megosztásnak vetünk alá. 50 átvitellel. A 12—35. cellákból elkülönített alsó fázisok elegyét butanollal extraháljuk, a butanolos kivonatot bepároljuk, mossuk és hexánt adunk 10 hozzá. Ily módon első generációként 1 g menynyiségben kapjuk a 13.057 R.P. antibiotikum hidrokloridját, majd az anyalúgok betöményítése útján második generációként további 1,1 g 13.057 R.P. antibiotikum hidrokloridot kapunk. ~^5 Az ily módon két generációban kapott termék vizes dioxánból átkristályosítva narancsvörös tűkristályokat képez, amelyek 225—230 C%on bomlás közben olvadnak; a kapott termék antibiotikum-aktivitása 67 E/mg. 20 Ha a 36—49. cellákból elkülönített alsó fázisok elegyét vetjük alá a fentihez hasonló kezelésnek, 1,1 g nyers 13.213 R.P. antibiotikumot kapunk, 1800 E/mg antibiotikum-aktivitással. Ebből butanolból, etilacetátból és 4 pH- 25 értékű Mac Ilvaine tompítóoldatból (3:7:10 tf. arányú elegy) álló rendszerben 50 átvitellel lefolytatott ellenáramú megosztás útján 0,5 g 13.213 R.P. antibiotikumot nyerünk, amely narancsvörös színű amorf por, antibiotikum-akti- 30 vitása 2000 E/mg. 11. példa: 35 625 liter fermentációs levet, amelyet a 2. példában leírt módon nyertünk, keverővel ellátott edénybe viszünk. A fermentációs lé pH-értékét tömény nátriumhidroxid-oldat segítségével 9-re állítjuk be. Az elegyet 30 percig keverjük, majd 40 32' kg szűrési segédanyagot adunk hozzá. Az elegyet azután szűrőprésen leszűrjük és a szűrőlepényt 275 liter vízzel mossuk. A kapott 780 liter térfogatú szüredékhez hozzáadunk 156 kg nátriumkloridot, majd az elegy pH-ér- 45 tekét 12 n sósavoldat segítségével 3-ra állítjuk be. A szüredéket azután 260 liter butanollal extraháljuk. A butanolos kivonatot csökkentett nyomás alatt, 35 C° hőmérsékleten 4 liter térfogatra töményítj ük be. A kapott koncehtrátu- 50 mot leszűrjük. A nyers antibiotikum a derített oldatból 32 liter petroléter hozzáadásának hatására leválik; ezt leszívatjuk, mossuk és 30 C° hőmérsékleten vákuumban szárítjuk. Ily módon, 227 g 9.865 R.P. antibiotikumot kapunk 55 nyers állapotban, barnás vörös por alakjában, amelynek antibiotikum-aktivitása 45 E/mg. 50 g fenti módon kapott nyers terméket 200 ml vízzel telített butanolban oldunk és a kapott oldatot 4 pH-értéken egy 500 ml alumíni- go umoxidot tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Az antibiotikum megkötődése után 4 liter vízzel telített butanollal eluálunk. Ily módon 3 színes frakciót különítünk el, amelyek térfogata 450 ml, 1500 ml, ill. 1500 ml. Az első 65 34 frakciót csökkentett nyomás alatt 50 ml térfogatra bepároljuk, majd 500 ml hexánt adunk hozzá. Ennek hatására 8,3 g 9.865 R.P. antibiotikum válik le, amelynek aktivitása 68,5 E/mg. A két utóbbi frakciót külön-külön bepároljuk csökkentett nyomás alatt 100 ml térfogatra, majd mindegyikhez 1 liter hexánt adunk; ily módon 4,4 g 9.865 R.P. antibiotikumot 216 E/mg aktivitással, ill. 1,35 g 9.865 R.P. antibiotikumot 800 E/mg aktivitással kapunk termékként. 12. példa: 425 liter fermentációs levet, amelyet az 1. példában leírt módon kaptunk (antibiotikum-aktivitása . 40 É/cm3

) oxálsavval 1,8 pH-értékre savanyítunk, majd leszűrjük a levet. A szűrőlepényt 100 liter vízzel mossuk, amelyet előzőleg oxálsavval 2 pH-értékre savanyítottunk; ily módon összesen 500 liter szüredéket kapunk. Ezt 8 pH-értéken előbb 150 liter, majd 100 liter kloroformmal extrahaljuk. A kloroformos kivonatokat egyesítjük és 4 pH-értékre beállított víz előbb 80 liter, majd 50 liter mennyiségével extraháljuk. Az egyesített vizes kivonatot n~nátriumhidroxid-oldattal 8 pH-értékre lúgosítjuk, majd előbb 40, azután 20 liter kloroformmal extraháljuk. Az egyesített kloroformos kivonatot kloroformos ecetsavoldattal (10 :100 tf.) 4 pH-értékre savanyítjuk, majd csökkentett nyomás alatt, 30 C° hőmérsékleten 50 ml térfogatra bepároljuk. 500 ml hexán hozzáadásával lecsapjuk a .nyers antibiotikumot, leszívatjuk, mossuk és vákuumban 30 C° hőmérsékleten vízfürdőn szárítjuk. Ily módon végülis 680 mg 9.865 R.P. antibiotikumot kapunk vörös por alakjában, amelynek antibiotikumaktivitása 1080 E/mg. . • 13. példa: 500 mg 9.865 R.P. antibiotikumot, amelyet a 4. példában leírt módon nyertünk, 100 ml nkénsavoldatban oldunk és a kapott oldatot 20 percig vízfürdőn melegítjük. Lehűlés után 3 X 200 ml etilacetáttal extrahájjuk, a szerves oldószeres kivonatot vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk, szűrjük és kis térfogatra pároljuk be. Ily módon .-szűrés, mosás és szárítás után 218,5 mg kristályos terméket kapunk. 150 mg fenti kristályos terméket 3 ml kloroform és 1,5 ml benzol elegyében oldunk, majd az oldatot 20 lap 310. sz. Arches^féle papíron, amelyet 20-%os fromamidos aceton-oldattal itattunk át, kromatografáljuk. Kloroform és , benzol 2 :1 arányú, formamiddal telített elegyével 90 percig hívjuk elő a kromatogrammot. A 20 papírlapból kivágjuk az Rí =, 0,86 értéknek megfelelő fő-zónát és az így kivágott 20 zónát keverőkészülékben, metanol jelenlétében szétmorzsoljuk. A kapott elegyet leszűrjük, bepároljuk és tízszeres térfogatú vizet adunk hozzá. 17