151420. lajstromszámú szabadalom • Eljárás proteolitikus enzimek előállítására

21 151420 22 Tulajdonság I proteáz II proteáz III proteáz hemoglobin TAME 2. Optimális proteolitikus hőmérséklet 3. 37 C°-on 30 percig stabil pH-értéken 4. Gátlás az alábbi anyagok által: jód aszkorbinsav Na-laurilszulfonát laurilamin L-cisztein etiléndiamin-tetra-ecetsav humán szérum 5. Aktivitás: fibrinolitikus" fibrinogenolitikus v, kazeinolitikus 6. Adszorpció ioncserélőkön: karboximetilcellulózon (0,7—0,9 milliekv./gramm) 0,01 mólos foszfát-tompítóból pH-nál eluálás erről, 0,05 mólos foszfáttompító-oldattal, pH 7. Molekulasúly 8. Ülepedési állandó 7,6 6,8 8,5 — 50 C° 50 C° 45 C° 5,0—8,5 4,5—10,5 3,0—6,3 nincs csekély erős csekély igen erős csekély igen erős , nincs erős erős erős teljesen inaktívál nincs erős nincs nincs igen erős nincs erősebb, mint II \ gyengébb, mint I , — proteáz proteáz ,; ' 3—6-szor hatáso1/3—1/6 hatású, — sabb, mint II protemint I proteáz áz jóval kevésbé hatáhatásosabb, mint — sos, mint II proteI proteáz áz; a fibrinolitikus és fibrinogenolitikus hatás nem kü/ lönbözik / mint II proteáz mint I proteáz — 5,5 6,0 felett, előnyösen 7,0-nál 36 000 4,5 6,5—7,0 3,3 Svedberg-egység. (6,8 pH-nál, 0,1 mólos foszfát-tompítóban (NaCl-hoz viszonyítva 0,1 mólos). 3,0 6,0 95 000 A fenti eljárás során az, inokulumok elkészítése, a proteázokat termelő gomba-kultúrák tenyésztése, a proteolitikus enzimek elkülönítése, az embergyógyászat és állatgyógyászat 50 terén való alkalmazási ' m'ódja természetesen számos különféle módon változtatható, ill. módosítható a szakmabeli ismeretek keretében, anélkül, hogy ezzel a találmánynak a fentiekben leírt és az igénypontokban meghatározott 55 terjedelmét túllépnők. » Szabadalmi igénypontok: •1. Eljárás proteolitikus enzimek, főként gom- eo bakultúrák által termelt proteolitikus enzimek szelektív elkülönítésére és szétválasztására, azzal jellemezve, hogy a proteázok esetleg előzetesen már tisztított oldatát lépésenként hozzuk érintkezésbe karboximetil-poliszacharid ioncse- 65 rélővel a 2,5 és 8,5 közötti tartományba eső pH-értéken és az egyes lépésekben így adszorbeált proteáz-frakciót oly módon eluáljuk, hogy az ioncserélőt oly eluálóoldattal hozzuk érintkezésbe, amely magasabb pH-értékre van tompítva, mint az a pH-érték, amelyen az illető proteáz-frakciót adszorbeáltattuk és kívánt esetben az így elkülönített proteázokat ioncserélő-kromatográfiával tisztítjuk tovább. 2. Az 1—2. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja proteolitikus enzimek szelektív elkülönítésére és elválasztására, azzal jellemezve, hogy az Aspergillus oryzae kultúrájából nyert proteázokat karboxi-metilcellulóz vagy karboximetildextrán kationcserélőn való adszorpció útján különítjük el a 2,5 és 5,5 közötti tartományba eső pH-értéken és az adszorbeált enzimeket 6,0 és 7,5 közötti pH-értéken eluáljuk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás kill