151420. lajstromszámú szabadalom • Eljárás proteolitikus enzimek előállítására

151420 23 24 viteli módja, azzal jellemezve, hogy az adszorpciót oly karboximetilcellulózon végezzük, amely I g karboximetilcellulózra számítva 0,7—0,9 milliekvivalens karboxilcsoportot .tartalmaz. 4. Az 1., 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja proteolitikus enzimek szelektív elkülönítésére és elválasztására, azzal jellemezve, hogy Aspergillus oryzae kultúrájából nyert és ezt követően tanninnal való lacsopás útján tisztított proteázokat karboximetilcellulóz kationcserélővtfl hozunk érintkezésbe a 2,5 és 5,5. közötti tartományba eső pH-értéken és az így adszorbeált proteázokat oly «módon eluáljuk, hogy az ioncserélőt 6,0 és 7,5 közötti pH-értékre beállított tompító-oldattal hozzuk érintkezésbe. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja az I proteáz, II proteáz és III proteáz szelektív szétválasztására és elkülönítésére az említett enzimek legalább egyikét, fehérje kísérő-szennyezések jelenlétében tartalmazó oldatokból azzal, jellemezve, hogy a proteáz-tartalmú oldatot 5,5 pH-értékre állítjuk be és ugyanilyen pH-értékre beállított karboximetilcellulóz kationcserélővel hozzuk érintkezésbe, majd a karboximetilcellulózt a rajta adszorbeált I proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból, amelyet azután 4,5 pH-értékre állítunk be és ugyanilyen pH-értékre állított karboximetilcellulózzal hozzuk érintkezésbe, majd ezt a karboximetilcellulózt a rajta adszorbeált II proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból, amelyet végül a III proteáz elkülönítésére 3,0 pH-értékre állítunk be és ugyanilyen pH-értékre beállított karboximetilcellulózzal hozunk érintkezésbe, majd a karboximetilcellulózt a rajta adszorbeált III proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból és a tiszta I, II és III proteázt külön-külön eluáljuk a ..kationcserélőről oly módon, hogy ezeket olyan tompító-oldatokkal mossuk, amelyek pH-értéke magasabb, mint az illető proteáz adszorbeáltatása során alkalmazott pH-érték. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja az I proteáz, II proteáz és III proteáz szelektív szétválasztására és elkülönítésére az említett enzimeket fehérje kísérő-szennyezésekkel együtt tartalmazó oldatokból, azzal jellemezve, hogy a leszűrt fermentációs levet, amelyet az Aspergillus oryzae alámerülő kultúrában a spóraképződés megkezdődéséig történő tenyésztése útján nyertünk, előzetesen a fehérjéknek (beleértve a proteázokat is) tanninnal való lecsapása, a tannin acetonnal történő eltávolítása és az acetonban oldhatatlan maradék újraoldása és 5,5 pH-értékre való beállítása útján tisztítjuk, majd a proteáz-tartalmú oldatot karboxilezett poliszacharid ioncserélővel, előnyöseri karboximetilcellulózzal vagy karboximetüdextránnal hozzuk érintkezésbe, mimellett az ioncserélőt előzetesen ugyanilyen pH-értékre állítjuk be, majd a poliszacharidszármazékot a rajta adszorbeált I proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból, ez utóbbit azután 4,5 pH-értékre állítjuk be és,karboxilezett poliszacharid ioncserélővel, Célszerűen ugyanilyen pH-értékre beállított karboximetilcellulózzal vagy . karboximetildextránnal hozzuk érintkezésbe, azután az ioncserélőt a rajta ad-5 szorbeált II proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból, mely utóbbit végül, a III proteáz elkülönítésére, 3,0 pH-értékre állítunk be és karboxilezett poliszacharid ioncserélővel, előnyösen ugyanilyen pH-értékre beállított kar-10 boximetilcellulózzal vagy karboximetildextránnal hozzuk érintkezésbe, majd a poliszacharidszármazékot a rajta adszorbeált III proteázzal együtt elkülönítjük az oldatból,.azután a tisztított I, II és III proteázokat külön-külön eluál-15 juk a megfelelő kationcserélőkről oly tompítóoldattal való mosás útján, amelynek pH-értéke magasabb, mint az illető proteáz adszorbeáltatása során alkalmazott- pH-érték. 7. A 6. igénypont szerinti eljárás kiviteli 20 módja, azzal jellemezve, hogy az adszorpció előtt az oldat pH-értékét 0,01 mólos foszfáttompítóoldattal állítjuk be a kívánt értékre. 8. A 6. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az eluálást 0,05 25 mólos foszfát-tompítóoldat segítségével végezzük. 9. Az 1., 5. és 6; igénypontok szerinti eljárás kiviteli módja az I proteáe, II proteáz és III proteáz tisztítására, azzal jellemezve, hogy á 30 karboximetil-cellulózt a rajta adszorbeált I proteázzal együtt elkülönítjük az oldattól, ez utóbbit azután 4,5 pH-értékre állítjuk be és ugyanilyen pH-értékre beállított karboximetil-cellulózzal hozzuk érintkezésbe, majd a karboxime-35 til-cellulózt a rajta adszorbeált II proteázzal együtt elkülönítjük az oldattól, végül a III proteáz '• elválasztására az oldatot 3,0 pH-értékre állítjuk be és ugyanilyen pH-értékre beállított karboximetil-cellulózzal hozzuk érintke-40 zésbe, azután a karboximetil-cellulózt a rajta adszorbeált III proteázzal együtt elkülönítjük az oldattól, majd a tiszta I, II és III proteázt külön-külön eluáljuk a kationcserélőről, oly tompítóoldatokkal való mosás útján, amelyek 45 pH-értéke magasabb, mint amilyenen az illető proteáz adszorbeáltatása történt, azután pedig az így kapott, egymástól és az eredeti oldatban jelenlévő fehérje-jellegű szennyezésektől elválasztott I, II és III proteázt külön-külön további 50 tisztításnak vetjük alá dietilamino-etilcellulózból vagy dietilaminoetildextránból álló anionos poliszacharid-ioncserélőn végzett ioncserélőkromatográfia útján. 10i A 9. igénypont szerinti eljárás kiviteli 55 módja, azzal jellemezve, hogy az Aspergillus oryzae kultúrája által termelt és tanninnal történő lecsapás útján előzetesen tisztított proteázokat különítünk el és választunk s*ét kationcerélő karboximetil-cellulózon történő lépésen-60 kénti adszorpcióval, majd az adszorbeált enzimeket 6,0 és 7,5 közötti pH-értéken történő eluálás után di;

etilaminoetil-cellulóz anioncserélpn kromatografáljuk. 11. A 10. igénypont szerinti eljárás kiviteli 65 módja I proteáz tisztítására, azzal jellemezve, 12