151394. lajstromszámú szabadalom • Kémszer és eljárás gonadotropin meghatározására

3 151394 4 esetben azonban ezektől erősen eltérő értékeket találunk. Ez valószínűleg azzal magyarázható, hogy a friss vizeletben a kalcium nagyrészt fehérjékhez kötött állapotban van jelen, úgy hogy a fennmaradó kis mennyiségű szabad kalciumionok a meghatározást nem zavarják. Ha azonban a vizeletet néhány napig állni hagyjuk, akkor a kalcium-ionok mennyisége 0,2 mg/ml körüli értékekig emelkedhet, valószínűleg az említett kalcium-fehérje komplexek felhasadása következtében. Az így megnövekedett mennyiségű kalcium-ionok az eritrociták spontán agglutinálódását okozhatják, a chorion-gonadotropin jelenlététől teljesen függetlenül is. A képződött agglutinátum külső megjelenése azonban ugyanolyan, mint a terhesség szempontjából negatív vizelet vizsgálata során képződő agglutinátumé. Más szóval a terhesség szempontjából pozitív (chorion gonadotropint tartalmazó) vizelet a magas kalciumion-tartalom következtében ugyanúgy viselkedhet, a meghatározás során, mint a negatív (chorion gonadotropint nem tartalmazó) vizelet. Ezért célszerűen olyan mennyiségű kelátképzőszert adunk a vizsgálandó vizelethez, amennyi elegendő a megnövekedett mennyiségű kalciumion lekötésére. Alkalmazhatjuk azonban a kelátképzőszert feleslegben is, minthogy az a meghatározásra nincsen befolyással. A kapott meghatározást eredmény az összes jelenlevő kalciumionok megkötése esetén is minden körülmények között helyes. A fentebb említett ismert meghatározási módszerhez hasonlóan ez a tökéletesített módszer is egyaránt alkalmazható a gonadotropinok minőségi és mennyiségi meghatározására, pl. emberi vizeletből történő terhesség-megállapításra, vemhes kanca szérumának vagy hipofíziskivonatoknak a vizsgálatára stb. A találmány értelmében tehát oly kémszert alkalmazunk a gonadotropin meghatározására, amely a) gonadotropinnal érzékenyített eritrocitákat, b) gonadotropin elleni antiszérumot és c) a vizsgálandó folyadékban jelenlevő kalcium-ionok megkötésére elegendő kelátképzőszert tartalmaz. A találmány tárgyát képezi továbbá a gonadotropinok meghatározására alkalmas kémszer előállítási eljárása is; ez az eljárás abból áll, hogy a gonadotrop hormonnal érzékenyített eritrociták szuszpenziójához vagy az említett hormon elleni antiszérum vizes oldatához vagy e kettő elegyéhez olyan mennyiségű kelátképző szert adunk, amennyi elegendő a vizsgálandó folyadékban jelenlevő kalciumionok megkötésére. Mind a gonadotropinnal érzékenyített eritrocitákat, mind pedig a gonadotropin elleni antiszérumot előnyösen liofilizált állapotban alkalmazzuk, míg a kelátképző szer vizes oldat alakjában, vagy pedig az előbb említett másik két alkotórész valamelyikével együtt liofilizálva kerülhet alkalmazásra. A találmány körébe tartozik továbbá a gonadotropinok e kémszer segítségével történő meghatározási eljárása is; ennek az eljárásnak a lényege az, hogy egy kémcsőben elegyítjük a hormon elleni antiszérumot és a hormonnal ér-5 zékenyített eritrocitákat a vizsgálandó folyadékkal, majd megállapítjuk, hogy történt-e agglutináció, mímeliett az eljárást az jellemzi, hogy a meghatározást valamely kelátképző szer oly mennyiségének jelenlétében végezzük, amennyi 10 elegendő a vizsgálandó folyadékban jelenlevő kaleiumionok megkötésére. A találmány szerinti módszerrel végzett meghatározás esetében megbízható következtetést végezhetünk a gonadotropin jelenlétére vagy 15 távollétére mindazokban az esetekben is, amelyekben a korábban isméit vizsgálati módszerrel téves vagy kétes eredményre jutottunk. így tehát a találmány által a meghatározási módszer megbízhatósága nagymértékben megnöve-20 kedett és a módszer pontossága lényegesen fokozódik, ami különösen a mennyiségi meghatározások esetében bír nagy jelentőséggel. A felhasznált antiszérum mennyiségétől függően már kb. 100 egység chorion gonadotropin (a vizelet 25 1 literére számítva) könnyen kimutatható. Emellett a találmány szerinti eljárás segítségével megbízható meghatározásokat végezhetünk huzamosabb ideje tárolt vizeletekkel is, ami az eddigi módszerekkel nem volt kielégítő mérték-30 ben lehetséges. A találmány további előnye, hogy a kelátképző szer hozzáadásával megkötődik a reakcióelegyben esetleg jelenlevő és a meghatározást szintén zavaró cink is. A találmány szerinti eljárásban felhasznál-35 ható kelátképző szerek példáiként a következők említhetők: etiléndiamin-tetraecetsav (rövidített nevén EDTA), citromsav, borkősav, glukuronsav, cukorsav, valamint ezek ilyen célra használható sói, pl. alkálifém-, ammónium- vagy 40 helyettesített ammóniumsói, továbbá polietiléngiikolok és poliaminokarboxilátok. Felhasználható erre a célra az etiléndiamin-tetraecetsavval rokon vegyületek, mint a metilamino-diecetsav, (2-karboxi-fenil)-iminoldiecetsav, uramil-N,N-45 diecetsav, nitrilo-triecetsav és ezek ilyen célra alkalmas sói is. Előnyösen azonban az etiléndiamin-tetraecetsavat, citromsavat, valamint ezek alkáli-, fém- vagy ammóniumsóit használjuk. 50 A kelátképző szert a kémszer valamelyik alkotórészéhez, tehát az antiszérumhoz vagy az eritrocitákhoz, vagy pedig ezek keverékéhez adjuk a kémszernek a vizsgálandó folyadékhoz való hozzáadása előtt. A kelátképző szert rend-55 szerint vizes oldat alakjában alkalmazzuk. Előnyösen oly módon járhatunk el, hogy a kelátképző szert az antiszérum oldatához vagy az eritrocita-szuszpenzióhoz adjuk, ezek liofilizálása előtt. 60 Ha a foszfát-tompítóval készített, pl. 1000— 5000 titer értékű antiszérum-oldatból 0,4 ml mennyiséget alkalmazunk, akkor ehhez előnyösen 0,2 súly% EDTA adható. Ez a mennyiség gyakorlatilag minden esetben elegendő a vize-65 létben jelenlevő összes kalciumion megkötésére.