151218. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására

' 3 séges, kristályosított alakban elkülöníteni. Ezeknek az alkotórészeknek a jelenléte és mennyiségi arányai a tenyésztési feltételektől függően változhatnak. Az említett alkotórészek kinyerési eljárását az jellemzi, hogy a fermentációs közeg szüretiekéből kloroformmal, diklórmetánnal vagy etilacetáttal extraháljuk a hatóanyagokat. Az így kapott kivonatot kisebb térfogatra töményítjük be, majd — amennyiben az eredeti fermentációs lé pH-értéke 3,5-nél kisebb volt — 0 C° hőmérsékleten nátronlúggal és vízzel mossuk. Az oly fermentációs levekből kapott kivonatokat, amelyek eredeti pH-értéke 3,5-nél nagyobb volt, 2 n sósavoldattal is mossuk. Ezáltal az inaktív, színezett szennyeződések eltávolíthatók a kivonatból. Az oldószer elpárologtatása után sárga vagy barna színeződésű olajszerű nyers terméket kapunk, amelyből megfelelő körülmények között, a jelenlevő olajszerű ballasztanyagok mennyiségétől függően, éter hozzáadásával egy nyers kristályosított termék választható le. Ennek vékony rétegű kromatogram felvételével történő elemzése azt mutatja, hogy az anyag főként A-verrukarint tartalmaz, amely azonban még B-verrukarint és esetleg B-roridint is tartalmaz kísérőanyagként. Ilyen összetételű termékekhez abban az esetben jutunk, ha Myrothecium verrucaria törzsek fermentációs termékéből indultunk ki; a Myrothecium roridum kultúráiból nyert nyers kristályosított termék főként A-roridint tartalmaz, amelyet rendszerint még B-roridin, A-verrukarin és B-verrukarin kísérnek. E nyers termékek egységes anyagokká történő szétválasztása alumíniumoxidon vagy szilikagél-oszlopon végzett egyvagy többszöri gondos adszorpciós kromatografálás és aceton-éter, metanol-éter, kloroform-éter-petroléter ill. diklórmetán-éter elegyekből való többszöri átkristályosítás útján folytatható le, aminek során az egyes frakciók tisztaságát vékony rétegű kromatográfia útján kell ellenőrizni. Ily módon a Myrothecium verrucaria fermentációs termékének szüredékéből kloroformmal és kloroform-metanol elegyekkel (99:1 és 98:2) eluált frakciókból rendszerint sikerül tiszta kristályos C-, D- és E-verrukarint, A- és B-roridint változó mennyiségekben elválasztani, míg a főterméket képező A-verrukarin ezzel a módszerrel rendszerint nem nyerhető ki tiszta állapotban, hanem még mindig B-verrukarinnal szennyezetten jelenik meg. A Myrothecium roridum fermentációs termékének szüredékéből hasonló módon főtermékként tiszta kristályos A-roridin, melléktermékeként pedig, ugyancsak tiszta kristályos alakban B-roridin, C-roridin, valamint A- és B-verrukarin nyerhetők ki. Az ezeket megelőzően benzollal eluált kromatográfiai frakciók útján olajszerű alkotórészek választhatók el, ezek kiselejtezésre kerülnek. Az említett frakciókat követően 98:2, 95:5, 9:1, 4:1 és 1:1 arányú kloroform-metanol elegyekkel eluált frakciók amorf terméket adnak. Az A- és B-verrukarint tartalmazó kristályelegy egységes alkotórészek-4 re való szétbontása megosztásos kromatográfia segítségével hajtható végre, amikor is nyugvó fázisként vizet, mozgó fázisként pedig vízzel telített benzol-kloroform elegyeket alkalma-5 zunk. A nyugvó fázis hordozójaként kovaföld szolgálhat. Az első frakciókban tiszta B-verrukarin, a későbbi frakciókban pedig egységes A-verrukarin különíthető el. A Myrothecium verrucaria és Myrothecium 10 roridum különböző törzseiből elkülönített anyagokat az alábbi I. táblázatban soroljuk fel: I. táblázat 15 Myrothecium verrucaria a) S 118 törzs: A-verrukarin B-verrukarin C-verrukarin 20 B-roridin b) S 750 törzs: A-verrukarin B-verrukarin A-roridin 25 c) S 833 törzs: A-verrukarin B-verrukarin D-verrukarin E-verrukarin 30 Myrothecium roridum a) S 973 törzs: A-roridin A-anyag (tiszta állapotban 35 nem különítettük el) b) S 1135 törzs: A-roridin B-roridin C-roridin 40 A-verrukarin B-verrukarin A-anyag (tiszta állapotban nem különítettük el) 45 Az S 973 és S 1135 jelzésű Myrothecium roridum törzsekkel nyert fermentációs termékekből kromatográfiai úton még egy további anyag mutatható ki, amelyet a fentebbi táblázat „A-anyag" elnevezéssel említettünk. Ezt 50 az A-anyagot tiszta állapotban eddig még nem különítettük el, csupán A-roridinnal kevert állapotban nyertük ki. A Myrothecium verrucaria S 118 törzs kultúrájából nyert micélium vizes metanollal való 55 extrahálása útján, a kapott kivonat víz és etilacetát közötti megosztásával lefolytatott további tisztítás után az etilacetátban oldható alkotórészből egy nyers termékhez jutunk, amelyből szilikagélen történő további tisztítás után 60 nyers (még B-verrukarint is tartalmazó) kristályos A-verrukarin és B-roridin választható el. Az elválasztott kristályos anyagok jellemzésére szolgáló klasszikus módszerek mellett a 65 vékony rétegű kromatografálás bizonyult ki-2