151028. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-aminocefalosporánsavak előállítására
9 151028 10 a 7-aminocsoport helyett 7-(5'-amino-N'-adipamil)-csoportot tartalmazó megfelelő vegyület. A C-cefalosporin könnyen átalakítható Cccefalosporinná, ha az előbbi vegyületet vizes közegben, savas körülmények között visszafolyató hűtő alatt forraljuk, amint ezt az 1960. november 30-án közzétett 593 777. számú belga szabadalmi leírás ismerteti. E művelet folytán az acetilcsoport lehasad az 5-helyzetben a tia~ zingyűrűn levő metilcsoportról és spontán laktonizálódás következik be, amely a kondenzált gyűrűs lakton képződésére vezet. A C-cefalosporin könnyen átalakítható CA cefalosporin-típusú vegyületekké is, ha vizes oldatban, piridinfeleslegének jelenlétében visszafolyató hűtő alatt forraljuk, pl. amint azt a fent említett 593 777 számú belga szabadalmi leírás ismerteti. Ez a reakció általában tercier aminokkal lefolytatható, amikor is a megfelelő CA-cefalosporin-típusú származékhoz jutunk, amelyben a tercier amia-csoport a tiazingyűrű 5-helyzetében levő metilcsoporthoz kapcsolódik és belső sót képez a 4-helyzetben levő karboxil-csoporttal. így CA-cefalosporin-típusú származékokhoz juthatunk, ha a C-cefalosporint nikotinnal, nikotinsavval, izonikotinsavval, nikotinamiddal, 2-aminopiridinnel, 2-amino-6-metilpiridinnel, 2,4,6-trimetilpiridinnel, 2-hidroximetilpiridinnel, szulfapiridinnel, 3-hidroxipiridinnel, piridin-2,3-dikarbonsavval, kínolinnal, szulfadiazinnal, szulfatiazollal, pikolinsavval és hasonlókkal reagáltatjuk. A dezacetil-C-cefalosporin könnyen előállítható, ha a C-cefalosporint citrus-acetileszteráz enzimmel kezeljük néhány óra hosszat, vizes foszfát-tompítóval 6,5 és 7 közöttire állított pH-értékű oldatban, Jansen, Jang és MacDonnell (Archiv. Biochem., 1947—48, 1516) módszere szerint. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: 40 g C-cefalosporint 150 ml 98%-os hangyasavban oldunk. Az oldatot „Celite" szűrőanyagon leszűrjük, a szűrőt és a lombikot 20 ml hangyasawal utánamosva. A szüredéket a mosófolyadékokkal egyesítjük, keverés közben jégfürdőben lehűtjük és 2 perc alatt hozzáadjuk 11,1 g nitrozilklorid 100 ml 98%-os hangyasavval készített hideg oldatát. Az elegyet hűtés közben további 3 percig keverjük, maid forgó lombikos bepárlóban, szobahőmérsékleten, csökkentett nyomás alatt sűrű pépszerű állapotúra bepároljuk. A kapott pépes maradékot 150 ml vízben oldjuk. Az oldatot jégfürdőben hűtjük és keverés közben, cseppenként tömény ammóniát adunk hozzá, míg a pH-érték 3,5-ig nem emelkedik, amikor is szilárd csapadék válik ki. A kapott szuszpenziót jégfürdőben fél óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük. A szilárd terméket a szűrőn kis mennyiségű hideg vízzel kétszer, majd hideg acetonnal ismét kétszer mossuk, azután megszárítjuk. A száraz termék mennyisége 6,14 g, ibolyántúli abszorpció-maximuma 264 millimikronnál van (e = 7900). Papírkromatográíiai és bioautográ-5 fiai vizsgálat során e termék 7-aminocefalosporánsavnak bizonyul. 2. példa: 10 5 g C-cefalosporint 300 ml jégecetben oldunk és 1,4 g nitrozilklorid kb. 50 ml jégecettel készített oldatát adjuk hozzá szobahőmérsékleten, 1 perc alatt. Az elegyet 10 percig keverjük, majd szobahőmérsékleten, csökkentett 15 nyomás alatt csaknem szárazra bepároljuk. Kb. 100 ml desztillált vizet adunk a maradékhoz, amikor is tiszta narancsvörös oldat képződik. Híg vizes nátriumhidroxidoldatot adunk 3,5 pH-értékig hozzá, majd az oldatot szobahőmér-20 sékleten és csökkentett nyomás alatt kb. 20—30 ml térfogatra töményítjük be, amikor is kristályos csapadék képződik. Ezt a csapadékot kiszűrjük, vízzel, majd acetonnal mossuk és megszárítjuk. A csapadék mennyisége 194 mg, 25 ibolyántúli abszorpciós maximuma 263 millimikronnál mutatkozik (e = 7820). Papírkromatográfiai és bioautográfiai vizsgálattal kimutatható, hogy ez a termék 7-aminocefalosporánsav. 30 3. példa: 10 mg C-cefalosporiit 0,5 ml jégecetben oldunk. Az oldathoz 0,36 ml N2 0 4 jégecetes ol-35 datot adunk (0,059 millimól/koncentrációban). A reakeióelegyet jégfürdőben 20 percig 15—16 C" hőmérsékleten tartjuk, majd szobahőmérsékleten, csökkentett nyomás alatt csaknem szárazra bepároljuk. A kapott 13 mg maradékot 40 minimális mennyiségű vízzel felvesszük. Az így nyert 2,5 pH-értékű oldatot vizes nátriumhidroxidoldat hozzáadásával 7,3 pH—értékre állítjuk be, majd desztillált vízzel 10 ml térfogatra hígítjuk és analitikai vizsgálatnak vetjük alá. 45 Az oldat fenoxiacetilkloriddal történő acilezés után papírkromatográfiával és bioautográfiai vizsgálattal is két biológiailag aktív foltot mutat, míg az acilezés előtt csak egyetlen folt jelentkezik; ez megerősíti, hogy az oldatban 5Q 7-aminocefalosporánsav volt jelen. 4. példa: 10 mg C-cefalosporint 10 ml jégecetben ol-55 dunk és az oldatot 5 mg N-nitrozo-3-nitrokarbazol 6 ml acetonitrillel készített oldatával elegyítjük. Az elegyet 1 óra hosszat 60 C° hőmérsékleten tartjuk, majd vákuum alatt, enyhe melegítéssel csaknem szárazra bepároljuk. A 60 maradékot vízben oldjuk, 2 pH-értéken etilacetáttal extraháljuk, majd 5,5 pH-értéken vizes káliumhidroxidoldattal extraháljuk vissza. A végső oldatot 10 ml térfogatra hígítjuk és elemzésnek vetjük alá. A papírkromatográfiai 65 és bioautográfiai vizsgálat azt mutatja, hogy az 5
