150709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új tetraciklin-származékok előállítására

150.709 5 letek történtek e törzs fág-tipizálására, kitűnt azonban, hogy ez a törzs nem tipizálható. A Staphylococcus aureus Rose-törzset (ATCC 14154. sz.) klinikailag különítették el egy tetraciklínnel nem gyógykezelhető beteg tályogából. Ez a mikroorganizmus in vitro és in vivo egyaránt ellenállóképesnek bizonyult a klinikailag használt tetraciklin-származékokkal szemben. A Staphylococcus aureus Rose-törzs koaguláz-pozitív és tellurit-pozitív; tetraciklinnel, penicillinnel, sztreptomicinnel és eritromicinnel szemben rezisztens. In vitro érzékeny karbomiccinnel, neomicinnel, klóramfenikollal és novobiocinnal szemben. A Staphylococcus aureus Rose-törzs tág-tipizálásának eredménye szerint e törzs fág-típusa 80/81. A 7-metilamino - 6-demetil-dezoxi-tetraciklin az egerek Staphylococcus aureus Smith-törzzsel való fertőzöttségével szemben intravénás alkalmazás esetén kb. négyszer hatásosabb a tetraciklinnel. Orálisan, szondával beadott egyetlen adagban alkalmazva, tízenhétszer hatásosabbnak bizonyult tetraciklinnel a 7-metilamino-6-demetil-6-dezoxi-tetraciklin a Staphylococcus aureus Smitb-torzszsel való fertőzéssel szemben. Emellett egereknek orálisan, szondával egyetlen adagban beadva, a 7-metilamino-6-demetil-6-dezoxi-tetraciklinnel kb. ötször akkora plazma-szint volt elérhető, mint a demetil-klórtetraciklin beadása esetén. Különös érdekességgel bír az a tény, hogy a 7-metilamino~6-demetil-6-dezoxi-tetraciklm egyedülállóan aktív a tetraeiklin-származékok közül a Staphylococcus aureus Rose-törzzsel szemben; ezzel az egyébként tetraciklin-rezisztens törzzsel szemben e vegyület váratlanul nagyfokú orális aktivitást mutat. Eddig ez az egyetlen ismert tetraciklin, amely az egerek e tetraciklin-rezisztens törzzsel való fertőzöttsége ellen orálisan hatásos. 20 egeret fertőztünk Styphylococcus aureus Rose-törzzsel és kezeltünk a 7-metilamino-6~demetil-6-dezoxi-tetraciklin csupán 16 mg/kg nagyságú orális adagjával; e 20 egér közül a fertőzés utáni hetedik napon 16 életben volt, míg az ugyanígy fertőzött, de nem kezelt 20 egér közül már az első napon 19 elpusztult. Ugyanilyen kísérleti körülmények között a tetraciklin a maximálisan tolerált 2048 mg/kg adagban is hatástalan volt. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa: 7-metilamino-6-dezoxi-6-demetil-tetraciklin. 792,9 mg (1,5 millimól) 7-amino-6-dezoxi-6-demetil-tetraciklin-szulfátot 90 ml metil-cellosolve oldószerben oldunk, 1/5 ml 40%-os vizes formaldehidoldatot, és 300 mg 10%-os palládiumos aktívszén katalizátort adunk hozzá és az elegyet szobahőmérsékleten, légköri nyomáson hidrogénezzük. A reakcióelegy 1—2 óra alatt 1—1,5 egyenértéknek megfelelő mennyiségű hidrogént vett fel. A hidrogénfelvétel befejeződése után a katalizátort kiszűrjük és a kapott narancsszínű oldatot beleöntjük. 1,5 liter vízmentes éterbe. A képződött csapadékot leszűrjük, vízmentes éterrel alaposan mossuk és megszárítjuk. A kapott termék menynyisége 391 mg. A termék turbidimetriás módszerrel meghatározva 852 mcg/ml-nek megfelelő hatóanyagtartalmat mutat. A kapott anyagból 83 mg mennyiséget semleges diatomaföld adszorbensen kromatografáltunk, heptán, etilacetát, metanol és víz 45 : 55 : 15 : 6 arányú elegyét alkalmazva a megosztásra. A vegyületet szabad bázis alakjában kromatograíáltuk, a minta pH-értéke 5.0 volt. A terméket a második frakcióban eluáltuk, a kapott mennyiség 15 mg volt. Elemzési adatok: a C^HV.TOYN;; képlet alapján számítva: N 9.45, N-—CH3

(3) 10,15; talált értékek: N 9,71, N—CH;i

{3) 10.04. A turbidimetriás meghatározás eredménye: 2019 mcg/ml, R/ 0,65 (nitrometán — benzol -piridin — pH = 3,4-tompító 20 : 10 : 3 : 3). 2. példa: 7-metilamino-6-dezoxi-6-demetil-tetraeiklin. 527 mg 7-amino-6-dezoxi - 6-demetil-tetracikIin-szulfát, 0,25 ml 97%i-os hangyasav és 0,2 ml 37%-os formaldehiloldat elegyét 2 óra hosszat foiralt.uk visszafolyató hűtő alatt. A lehalt reakcióelegyet 100 ml vízzel felvettük; a papirkromatográfiai elemzés szerint a jelenlevő anyag 7-mefJlamino-6-dezoxi-6-demetil-tetraciklm és e vegyület 4-epimérje 3. példa: 7-metilamino-6-dezoxi-6-demetil-teLraciklin. 278,7 mg 7-nitro-6-dezoxi-6-demetil-tetraciklin-szulfát 15 ml 93%-os metil-cellosolve oldószerrel {7% víztartalommal) készített oldatához 0,75 ml 40%-os vizes formaldehidoldatot és 50 mg 10%-os palládiumos aktívszén katalizátort adtunk, majd az elegyet szobahőmérsékleten, légköri nyomás alatt hidrogéneztük. A 4 egyenértéknek megfelelő hidrogénmennyiség felvétele 2 óra alatt fejeződött be. A katalizátort ezután kiszűrtük és az oldatot 300 ml vízmentes éterbe öntöttük. A képződő! csapadékot szűréssel elkülönítettük, vízmentes éterrel alaposan mostuk és megszárítottuk; a kapott termék mennyisége 2'öf) mg volt. A turbidimetriás meghatározás eredménye: 1600 mcg/ml. 4. példa: 9-meülamino-6-dezoxi-6-demeti]-tetraciklin. 23.3,5 mg 9-amino-6-dezoxi-6-demetil-tetraciklin-hidroklorid 8 ml 0,1 n metanolos sósavoldattal készített oldatához 15 ml metil-cellosolve (etilénglikol-monometiléter) oldószert, 0,5 ml 40%|-os vizes formaldehidoldatot és 100 mg 10%~os palládiumos aktívszén katalizátort adtunk, majd a reakcióelegy et szobahőmérsékleten, légköri nyomás alatt hidrogéneztük. Az 1—1,5 egyenértéknek megfelelő hidrogénmennyiség felvétele 1 óránál rövidebb idő alatt befejeződött. A katalizátort kiszűrtük és a kapott oldatot beleöntöttük