150332. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy új antibiotikum (ZN-6) előállítására
150.332 5 A módszer egy változatában a ZN—6 antibiotikum egy előállított sóját a szóban vorgó bázissal reagáltathatjuk, vagy pedig a kívánt ZN—8 antibiotikum sót előállíthatjuk az előbb előállított ZN—6 antibiotikum só és .egy másik, a kívánt fém iont tartalmazó bázis kettős elbontásával. Az előállított, érdeklődésre számot tartható sók közül az alábbiakat említjük: vízoldható nátrium-, kálium-, ammónium-, trietilairnin-, piperidin-, moríolin-, eiklohexslarnin, és .rnonoetanolarnki sók, valamint a vízben kévéséé oldódó kalcium-, magnézium-, dibenzil-etiién-diamin-, benzil-^-feniletilamin- és' procaki sók. A találmány szerinti eljárással előállítható egyéb sók közül említést érdemiéinek azok is, amelyek bázis komponensként piridínt, piperazint, guainidin.í, metilarnint, ©tilamint, be.nzilam.int vagy hasonló helyettesi teilen vagy helyetesitett arninokac tartalmaznak; továbbá azok, amelyekben a bézikus komponens kvaterner amin, például cholin és származékai, vagy pedig valamilyen más, bázikus tulajdonságú antibiotikum, például streptomicin. A .találmányt az alábbi példák közelebbről megvilágítják: 1. példa: A ZN—6 antibiotikum, benzol szolvárja. 1,5 rn3 -es, rozsdaálló acélból készült, kavaróval ellátott fermentáló tartályba 1,00 m3 alábbi összetételű íemyészfcözeget vittünk: Glukóz Hús és baibliszt Búzadara-lé, 50% száraz anyag Glicerin MgSQ4 NaCl Vízzel feltöltve 20,0 20,0 kg 2,5 kg 7,5 kg 0,05 kg 4,0 kg 1000,0' literre. A tenyészSközeg pH-ja 6,1; ezt az értéket híg NaOH oldat adagolásával 6,i5-re állítottuk be, majd a közeget hőkezeléssel sterilizáltuk. Lehűtés után 3 liter Fusidium cocckueum Fuck K. Tubakival oltottuk be, amelyet 48 óra hosszat rázópalacikban 28 C°-on tenyésztettünk. A tartály tartalmát kavartuk és 0,6 m3 levegő/óra sebességgel 28 C°-on, 96 óra hosszat levegőztettük. Ez alatt az idő alatt a pH a beállított 6,5 értéken maradt; utánigazítására meni volt szükség. E fermentálási idő eltelte után a tanyészfcözeig antibiotikus aktivitását az ismert agar-csésze módszerrel Staphyloloocus aureus-on vizisgáluk és azt találtuk, hogy aktivitása literenként 70 mg ZN—6 antibiotikumnak felel meg; a meghatározást úgy végeztük, hogy összehasonlítást eszközöltünk ZN—6 antibiotikum ugyanezzel a módszerrel megállapított aktivitásával. J A micéiiUímoí a tenyésziközegből szűréssel különítettük szűrlet 700 liter volt. A szűrlet pH-ját 25%-os kénsav adagolásával 3,3-ra állítottuk be, majd 230 liter butilacetáital Pobielniakextrahálóban. ellanáraanban extraháltuk. Az így kapott foutfeeetétos fázist egyszeri adagban 77 liter vízzel extraháltuk, amelyhez 10%-os NaOH-t adtunk mindaddig, míg a vizes fázis pH-ja 10,0 volt. Ezután a vizes fázist a butilacetátos fázistól elkülönítettük, A vizes fázis pH-ját 25%-os kénsavoldattal 3,2-re állítjuk be, és az oldatot 40 liter metilizobutilketonnal extraháljuk. A metilizobutilketonos fázist a vizes fázistól elválasztjuk, 40 g aktív széninél kezeljük, majd ezt követően vákuumban 25 C° forrást hőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékot 500 nil benzolban feloldjuk, és az oldatot éjszakán át hűtőszekrényben állni hagyjuk. Eközben a ZN—6 antibiotikum benzol-szolvátja kikristályosodik. Szűrjük és benzolból átkristályosítjuk; így 12,0 g tiszta anyagot kapunk, melynek olvadáspontja 189—189,5 C°. 2. példa: A ZN—6 antibiotikum náiriumsója. 500 mg 1. példa szerint előállított benzol szolvátot 20 ml víziben szuszpendáltunk és a szuszpenzióhoz 9,0 pH elérésiéig V2 N vizes NaOH-t adtunk. Az oldatot szűrtük, majd. a szőriéihez 50 ml n-butanolt adtunk; ezután az: oldat víztartalmát azeotropos vákuumdesztillál ássál eltávolítót tuk. A maradékból a kívánt nátriumsót éter hozzáadásával távolitottuk el. Szűrtük, éterrel mostuk és szárítottuk. Etanol/aeetonból átkristályosítva 360 mg tiszta, kristályos nátriumsót kaptunk. 3. példa.: ZN—6 antibiotikum előállítása. A Fusidium eoceineuni Fuok K. Tubáki spóráit agar-táptalajról 3 liter, alábbi összetételű steril tenyószoldatiba vittük: Glicerin Búzadara-lé Glukóz KH2PO4 Szójaliszt NaCl MgS04 -7H 2 0 FeS04 • 7H2 0 CuS04 -5H 2 0 A tenyészetet aerofoosan 27 C°-on 40'—60 óra hosszat reeiprokáló rázóban inkubaltuk. Az így kapott oltóanyagot a kereskedelmi minőségű fermentorhoz közvetlenül felhasználhatjuk oltóanyagként, a példa szerinti eljárásban .azonban átvittük egy 700 literes, a kereskedelmi minőségű fer mentorral azonos összetételű tenyészközeget tartalmazó tartályba és 26 C°-.on 40—48 óra hosszat inkubáltujk; ezzel biztosítottuk a gomba vegetatív szaporodását a főíermemtorba oltás előtt. Ezt követően az alábbi összetételű 16 000 liter tenyészközeget, amelyet sterilizálás előtt 7,2 pH-ra állítottunk be, a ioíermentorbsn Va óra hosszat 120 C°-oii sterilizáltunk és lehűtés után az előbb említett két .beoltóanyag módosulat egyikével beoltottuk. 7,5 g por liter 2,5 ?•> .0.0 0) 0,6 )) 3,0 •n 4,0^ »> 0,5 Í> 0,005 SJ 0,004 )?
