149695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 16-metilén-17-alfa-acetoxi-progeszteron-származékok előállítására
149.695 b csökkentett nyomás alatt bepároljuk. A maradékot Florisil segítségével szűrjük és metanolból átkristályosítjuk. A kapott 6-Mór-6-dehidro-16--metilen-17ß-acetoxi-progeßzteron ibolyántúli színképe, 284,5 m/x-nél maximumot mutat, extink-cióia E 10/o =-- 550. J 1 sin f) 15 liter oly tápoldatból, amely 1% élesztőkivonatot tartalmaz és pH-értéke 6,8 750 ml^ mennyiséget Bacillus sphaericus rázott kultúrájával oltunk be. A kultúrát keverés és erős levegőztetés közben 28 C° hőmérsékleten fejlődni hagyjuk, majd 12 óra múlva 7,5 g 16^metilén-17«^acetoxi-pnogeszteron 250 ml metanollal készített oldatát adjuk hozzá. Az 1,2-helyzetbeli dehidrogénezés előrehaladását papírkromatográfiai vizsgálattal ellenőrizzük; a dehidrogénezés rendes körülmények között 10—15 óra alatt fejeződik be. A fermentációs oldatot ezután kloroformmal többször extraháljuk, az egyesített kloroformos kivonatot bepároljuk és a maradékként kapott 1-dehidro-l 6-metilén-l 7a -aeeitoxi-progeszter ont éteriből átkristályosítjuk. g) Az lf) példában leírthoz hasonló módon kapunk a 6«-metil-16-imetilén-17f «-acetoxi-pirog i eszteronbói mikrobiológiai dehidrogénezés útján 1-dehidrO'-6«-metil-l'6-metilén-17«-acetiOXÍ-proge'Szteront. h) 3,5 g 6-dehidro-16-metilén-17ö: -aceíoxi-progeszteront 70 ml dioxán'ban oldunk és 3,5 g 2,3--diklór-5,6-dicián-benzo'kinon hozzáadása után az elegyet 6 óra hosszat fox'raljuk visszacsepegő hűtő alatt. Az oldatot ezután kloroformmal hígítjuk, majd vízzel, utána 30- ml n-nátronlúg-oldattal, végül ismét vízzel kirázzuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékként kapott l,6-bis7>dehldro-16--metilén-17a -acetoxi-progeszteront éterből átkristályosítjuk. i) Az lf) példában leírthoz hasonló módon kapjuk a 6a -fluor-16-metilén-17a-aeetoxi-progeszteronból Bacillus sphaericus segítségével történő mikrobiológiai dehidrogénezés útján az l-dehidro-6a-fluor-16-metíién-17«-acetoxi-;progeszteront k) Az lf) példában leírthoz hasonló módon kapjuk a ß-klor-ie-metilen-n'^acetoxi-progeszteronból mikrobiológiai dehidrogénezés útján az 1-dehidro-6-klőr-16-imetilén-17 c '-acetoxi-proges:ztero.nt. 1) Az lf) példában leírthoz hasonló módon kapjuk a 6-dehidro~6-klór-l'6-metilén-l 7"; -aeetoxi-progeszteronból mikrobiológiai dehidrogénezés útján az l,6-bisz-dehidro-6»klór-16-mefilén-17a -acetoxi-progeszteront. 2. példa: Az epoxid-gyűrű felhasítása. a) 3,5 g 9/>',Il/?-oxido~16-metilén-17«-aoetox.-progeszteront 35 ml absz, kloroformban oldunk és az oldathoz —60 C° hőmérsékleten 10 ml tetrahidrofurán, 4 ml kloroform és 4 g fluorhidrogén elegyét adjuk. Az elegyet 4 óra hosszat hagyjuk állni —30 C° hőmérsékleten, majd nátriumhidrogénkarbonát-oldatiba öntjük és kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatot szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot, amely 9«-fluor-ll/--hidroxi-16^metílén-17ö -acetoxi-progeszteronból áll. aceton és éter elegyéből átkilstályosítjuk. A termék olvadáspontja 243—245 C°.['-]D — —32" (kloroformban), ?, max = 238 rn/x. E ; '° -=• 445. 1 cm b) A 2a) példában .leírthoz hasonló módon állítjuk elő a ß-dehidro-O^-iluor-li^-liidroxi-ie-Hmetiién-17«-acetoxi-progesz;teront. a G-dehidro-SMl'*-oxido-16~m etilén-17«-acetoxi-pr ogeszteron íelha -sítása útján. E termék olvadáspontja 234—235 C°. c) A. 2a) példában leírthoz hasonló módon állíthatjuk elő a 6'<-metil-9/?,ll/2-oxido-16-metilén-17«-acetoxi-progeszíeron felhasítása útján a 6a -metil-9«-fluor-ll.p-hidroxi-16-;metilén-]7«-acetoxi-ip'rogeszteront. d) A 2a) példában leírthoz hasonló módon állítható elő a ÖKiehidro-e^metil-g/^ll/S-Qxido-lß-metilén-17a-acetoxi-progeszteron felhasítása útján a 6-dehidro-6-metil-9a-fluor-ll/i-'hidroxi-16"metilén-17, -'~acetoxi-prog'eszteron, 3. példa: Oxidáció. a) 10 liter oly tápoldatot, amely 0,8% glükózt, 0,5% élesztőkivonatot és 0,3% ammóniumkloiridot tartalmaz és amelyet 1/30 mól Sörén sen-f éle foszí'át^puffer-oJdattal 7,0 pH-értékre állítottunk be, Flavobacterium dehidrogenaris rázott kultúrájának 400 mi-jével oltunk be. A kultúrát keverés és erős levegőztetés közben 12 óra hosszat hagyjuk fejlődni 28 C° hőmérsékleten, majd 10 g 16-metiié:]i-5-pregnen--3/? , 17«~diol-20-on-dia:cetát lehetőleg kevés dimetillormaniiddal készített oldatát adjuk hozzá, majd a kultúrát 6—9 óra hosszat hagyjuk változatlan körülmények között fejlődni. A reakciót oly módon ellenőrizzük, hogy egy-egy extrahált minta 240 millimlkrormál mutatott ibolyántúli abszorpciójának extinkcióját folyamatosan ellenőrizzük; ennek mértéke szerint szabjuk meg a reakció megszakításának időpontját. A reakcióelegyet ezután többször extraháljuk kloroformmal, a kloroformos kivonatokat egyesítjük, szárítjuk és bepároljuk. A visszamaradó 16-metilén-l 7«-acetoxi-progeszteront tisztítás céljából éterből átkristályosítjuk. A termék olvadáspontja 218—219 C°. b) 4 g 6-metil-16-'metilén-5-pregnen-3/? ,17«-diol-20-on-17-aeetátot 150 ml toluol és 40 ml ciklohexanon elegyében oldunk, majd az oldatból kb. 50 ml oldószert ledesztillálunk a nedvesség teljes eltávolítása, céljából. Ezután az elegyhez 4 g alumínium-izopropilát 20 ml toluollal készített oldatát adjuk, majd 2 óra hosszait visszacsepegő hűtő alatt forraljuk a reaikcióelegyet. Ezután 200 ml vizet és 2 ml jégecetet adunk hozzá, majd vízgőz-desztiiláció útján eltávolítjuk a szerves oldószert. A vizes maradékot •többször extraháljuk kloroformmal ás az egyesített kloroformos oldatot szárítás után bepároljuk. A nyers 6a -metil~ -16-metilén-17«-acetoxÍHp.rogeszte!r ónból álló maradékot tisztítás céljából, éterből átkristályosítjuk. c) 5,5 g 5«-bróm-6,#-fluor-16-metiién-allopre>gnán-3//:; ,17a-diol-20-on-17-acetátot 200 ml acetonban oldunk és az oldatot 0 és 10 C° közötti hőmérsékletre hűtjük le. Ezután keverés közben 3,36 ml oly krómsavanhidrid-oldatot csepegtetünk hozzá,
