149063. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta 1-dehidro szteroidok mikrobiológiai átalakítására
2 149.063 tolják. Fontos az a felismerésünk is, hogy ezeknek a kisebb gyűrű-rendszereknek a túloxidációt megakadályozó hatása, bizonyos enzim : szubszlratum arány esetében érvényesül optimálisam. Ez a kísérleti eredmény tette szükségessé, hogy C. simplex tenyészeteit megfelelő arányban hígítsuk úgy, hogy a legalkalmasabb hígítást denziíometriás mérés alapján állapítsuk meg. Általában a 25—30-szor hígított tenyészetek (0,010—0,015 gra;mim% 'szárazanyagtartalommal) bizonyultak alkalmasnak a jelenség kiváltására. A hígítást mindig steril csapvízzel végeztük el. A hígítás mint fermentációs fogás, a feldolgozás szempontjából is előnyösnek bizonyult, mert a f érmen táturruból származó szennyezések százalékos arányát a hasznos termeikhez képest előnyösen csökkentette. Találmányunk eljárás Al-es kettőskötésí tartalmazó szteroidok előállítására Corynebacterium simplex segítségével, melyre jellemző, hogy a különféle /14,3-nketo-szteroidokat — /14-andro'szténdiont, metiltesztoszteront, Reichstein-féle S-vegyületet, kortizont, hidrokortizont — a 148 093 sz. törzsszabadalomban leírt inhibitorok jelenlétében oxidáltatjuk. Eljárásunk biztosítja, hogy a keletkezett hasznos termék, nevezetesen a /11,4-androsztadiéndion, a zH-dehidronietiltesztoszteron, a /ll-dehidro-Reichstein. S-vegyület, prednizolon, prednizon ne oxidálódjon tovább nem hasznosítható származékokká. Eljárásunk kivitelezését az alábbi példák szemléltetik: 1 .. sz. táfolázE tt Tenyészet kora 1. 2. 3. 4. órákban az adagolás után tény ész e t 0 0,125 0,197 0,112 0,133 6 0,710 0,285 0,565 0,820 12 0,750 0,430 0,830 0,820 18 0,005 0,478 0,830 0,830 24 0 0,550 0,830 0,765 30 ü 0,660 0,805 0,735 36 0 0,830 0,800 0,670 42 0 0,735 0,800 0,570 48 0 0,730 0,740 0,330 A ^-naftol tehát erőteljesen gátolta a keletkezett androsztadiéndion oxidatív lebontását. 2. példa: Az 1. példában részletezett módon készítettünk C. simplex tenyészetet. Ebből a tenyészetből desztillált vízzel sterilen olyan hígítást készítettünk, amely Biró—Fedoresák-féle fotométerrel mérve 9 N szűrő összeállítással 0,240-es extinkciót mutatott. 100—100 ml így hígított tenyészethez a következőképpen adagoltunk: 1. 20 mg hidrokortizon 2. 20 mg hidrokortizon 3. 20 mg hidrokortizon 4. 20 mg hidrokortizon 5. 20 mg hidrokortizon 0,5 mg naftalin, 0,5 mg fenantrén, 2 mg fenantrén, 5 mg fenantrén, 1. példa: C. simplex kétnapos burgonyás ferdeagar tenyészetéről 5 ml desztillált vízzel szuszpenziót készítünk és ezzel oltunk be 100 ml CSS jelű táptalajt (4,4 g KH2 P0 4 , 8,8 g Na 2 HP0 4 , 7H 2 0, 20 g sörélesztőkivonat szárazanyag 1 literre feltöltve) 500 ml-es Erlemmeyer lombikban. A lombikokat 121 C°-on 25 percig sterilizáltuk. A beoltott lombikokat 28 C°-on 200-as fordulatszáimú rázóasztalon inkubáltuk 24 óra hosszat. A kapott tenyészet 5 ml-ével oltottunk újabb 100 ml táptalajt. Az így előállított 24 órás tenyészetekhez adagoltunk: 1. 20 mg /í4-androszténdiont 2. 20 mg /14-androszténdiont -f- 5 mg ß-naitolt, 3. 20 mg /14-androszténdiont + 2 mg /5-naftolt, 4. 20 mg zl4-andiroszténdiont + 1 mg 0-naftolt, Az egy lombikba beadagolt anyagokat mindig összesen 2 ml acetonban ok" ittuk. A tenyészeteket adagolás után is 28 C° hőmérsékleten, 200-as fordulatszámú rázóasztalon inkubáltuk. A keletkezett androsztadiéndion mennyiségét Mizsei, Szabó, Wix kolorimetriás módszerével határoztuk meg, 0,830-as extinkció felelt meg 20 mg/100 ml androsztadiéndion tartalomnak. Az eredményeket az 1. sz. táblázat szemlélteti. A tenyészeteket az adagolás után is 28 C°-on rázattuk 200-as fordulatszámú rázóasztalon. A keletkezett prednizolon mennyiségét kénsavas kromogéinképzés alapján állapítottuk meg: 0,480-as extinkció felelt meg 20 mg prednizolontartalomnak 100 ml tenyészetben. Az eredményeket a 2. sz. táblázat foglalja össze. 2. sz. táblázat Tenyészet kora 1. 2. 3. 4. 5. órákban az adagolás után tenyészet 0 0,075 0,048 0,078 0,050 0,063 3 0,252 0,171 0,148 0,126 0,142 6 0,250 0,230 0,235 0,217 0,223 12 0,393 0,430 0,378 0,375 0,380 24 0,319 0,342 0,392 0,362 0,398 48 0,137 0,320 0,373 0,372 0,340 72 0,013 0,368 0,143 0,072 0,098 A 2. sz. táblázat jól szemlélteti, hogy naftalin és fenantrén az alkalmazott körülmények között lassította a keletkezett prednizolon lebomlását. 3. példa: A 1. példában részletezett módon készítettünk Corynebacterium simplex tenyészetet, amelyet a 2. példában megadott módon hígítottunk és 100— 100 ml ilyen hígított tenyészethez a következőképpen adagoltunk:
