148864. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 16-metilénszteroidok előállítására
6 148.864 -acetát (IX.a, R2 = acetil; o. p. 210—211°, (")D—34,7° (dioxánban), ^ max 243 mfi, 1% ' E lem 390 )' f) A IX.a képletű vegyület (R2 = acetil) felhasítása fluorhidrogénnel. 4,2 g 16-metilén-9/?,llfS-oxido-4-pregnén-17«,21--diol-3,20-dion-21-acetátot 42 ml absz. kloroform-' ban oldunk és —60°-on hozzáadjuk 40 ml tetrahidrofurán, 15 ml kloroform és 25 g fluorhidrogén elegyének 25 ml-ét. A reakcióelegyet 4 órán át —30°-on, csatlakozólag további 4 órán át 0°-on állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet nátriumhidrokarbonát oldatba öntjük, kloroformmal kivonatoljuk, a kloroformos oldatot szárítjuk és bepárologtatjuk. A maradékot acetonból átkristályosítjuk. 9«-fluor-16-metilén-hidrokortizon-21--acetátoit (X.a, R2 = acetil) kapunk, amely 209— 211°-on olvad, (a)D +71,4° (kloroformban), / max 238 mix, E*"^ 399. g) Az Xa képletű vegyület (R2 = acetil) elszappanosítása. 1 g 9«-fluor-16-metilén-hidrokortizon-21-acetátot 25 ml metanolban forrásig hevítünk és a forró oldathoz hozzáadjuk 5 ml vízben oldott 0,23 g nátriumhidrokarbonát forró oldatát. A reakcióelegyet 7 percig forraljuk. Ezután beöntjük kb. 300 ml vízbe és a kivált nyers elszappanosítási terméket leszívatjuk. Acetonból átkristályosítva tiszta 9«-fluor-16-metilén-hidrokortizont (X.a, R2 =H) kapunk, o. p. 242—244°, («) D +80° 1% (dioxánban) / max 238 m/t, E l ^ 449. hí — Az X.a képletű vegyület (R2 = H) 1-dehidrálása mikrobiológiai úton. Kisméretű fermentorba 15 1 1%-os élesztőkivonatból álló, pH—6,8-ra beállított tápoldatot helyezünk és beoltjuk a . Bacillus sphaericus (E. Merck-féle gyűjtemény, 1001. sz.) rázótenyészetének 0,5 literével. A tenyészetet állandó kavarás és erős levegőztetés közben 28°-on fermentáljuk és mintegy 10 óra múltán hozzáadunk 300 ml metanolban oldott 7,5 g 9«-fluor-16-metilén-hidrokortizont. A dehidrálást papírkromatográfiával ellenőrizzük és az 28—36 óra alatt befejeződik. A tenyészet-oldatot azonos térfogatú kloroformmal háromszor kivonatoljuk és az egyesített kloroformos oldatokat bepárologtatjuk. A nyers 9a-fluor-16-metilén-prednizolont (X.b, R2 = = H) etanolból átkristályosítva tiszta állapotban kapjuk meg. O. p. 241—243°, (a ) D +26,6° dioxán-1% ban), x 238,5 m;a, E lc ' m 410. h2 = Az X.a (R 2 = acetil) képletű vegyület 1-dehidrálása vegyi úton. 3 g 9«-fluor-16-metilén-hidrokortizonacetátot 150 ml tercier butanolban feloldunk, 1,5 ml ecetsavat és 1 g szeléndioxidot adunk hozzá és 48 óra hosszat visszaf olyasra állított hűtővel felszerelt lombikban forraljuk, mimellett 24 óra múltán további 1 g szeléndioxidot adunk hozzá. Az oldószert vákuumban lehajtjuk, a maradékot ecetészterben felvesszük, nátriumhidrokarbonát oldat'tal közömbös reakcióig mossuk, szárítjuk és bepárologtatjuk. A sötétbarna maradékot FLORISIL-oszlopon szűrjük. A benzol/kloroform (1 : 4)eluátból a 9«-fluor-16-metilén-prednizolon-21-acetátot (X.b, R2 = acetil) elkülönítjük és acetonból átkristályosítjuk. Tiszta állapotban o. p. 223—224°, Ámax 238 m ft E^ 0 m 379. i = Az X.b képletű vegyület (R2 = acetil) elszappanosítása. Az acetátból a 3.g példában ismertetett elszappanosítással megkapjuk a szabad 9«-fluor-16-metilén-prednizolont (X.b, R2 = H). O. p. 241—243°. 4. a) Az V.a képletű vegyület (R2 = H) dehidrálása mikrobiológiai úton. A Reichstein-féle S-szubsztancia 16-metiiénszármazékának 7,5 g-ját a Bacillus sphaericus 15 liter tenyészet-oldatával a 3.hi példában ismertetett módon dehidráljuk. Acetonból való átkristályosítás útján tisztán megkapjuk a Reichstein-féle S-szubsztancia l-dehidro-16-metilén-származékát (V.b, R2=H). O. p. 224—226°, («) D —16° (kloroformban), / max 244 írni, E 1 c ° m 473. b= Az V.b (R2 = H) képletű vegyület l.l/?-hidroxilezése. A 2.a példában ismertetett módon a Reichsteinféle S-szubsztancia l-dehidro-16-metilén-származékának 5 g-ját a Curvularia lunata tenyészetével 16-metilén-prednizolonná (Vl.b, llA-OH, R2 = H) alakítjuk át. O. p. 225—226°. c= A Vl.b képletű vegyület (11^-OH, R2 = H) acetüezése. 5 g 16- metilén-prednizolont a 2.b. példában ismertetett módon a; megfelelő 21-acetáttá (Vl.b, 11/S-OH, R2 = acetil) alakítunk át. 5. a) Az V.b (R2 = H) vegyület lla-hidroxilezése. 5% glukózát, 0,2% élesztőkivonatott, 0,3% nátriumnitrátot, 0,05% magnéziumszulfátot, 0,001% ferroszulfátot és 1/30 mól Sörensen-féle foszfátpuffért tartalmazó (pH = 5,6) tápoldat 15 literét kisebb fermentorba helyezzük és beoltjuk az E. Merck-féle gyűjtemény 2168 sz. gombájának 800 ml rázótenyészetéivel. A tenyészetet kavarás és erőteljes levegőztetés közben 24 órán át fermentáljuk, majd hozzáadunk 40 ml dimetilformamidban oldott 5 g Reichstein-féle S-szuhsztancia-l-dehidro-16-metilénszármazékot. A reakció lezajlása után az elegyet a 2.a példában ismertetett módon dolgozzuk fel. A nyers terméket acetonból átkristályosítva, tiszta 16-metilén-11-epi-prednizolonhoz jutunk (Vl.b, lla-OH, R2 = H). bi) Víz lehasítása a Vl.b képletű vegyületből (lloc-OH, R2 = H). A 16-métilén-ll-epi-prediizolonból (a 21-acetáton és. a ll-tozilat-21-acetáton keresztül) a 3.ci példában ismertetett módszerrel a 16-metilén--l,4,9{ll)-pregnatrién-17a-21-diol-3,2i 0-dion-21-ace-tátot (Vll.b, R2 = acetil) állítjuk elő. b2 = Víz lehasítása a Vl.b képletű vegyületből (11/J-OH, R2 = acetil). 1 g 16-metilén-prednizolon-21-acetátot a 3.C2 példában ismertetett módon 16-metilén-l,4,9(ll)•
