148444. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszilocibin és pszilocin kinyerésére
4 148.444 350 g cellulózpor feliszapolásával vízzel telített butanollal állítunk elő. Folyamatos eljárásban vízzel telített butanollal előhívunk, amikor is egyenként 100 ml-es frakciókat választunk le és ezeket nagyvákuumban 50°-ot meg nem haladó fürdőhőmérsékleten bepároljuk. A középső frakciók (3,35 g) pozitív Keller-féle színreakciót adnak és azokat a további tisztításhoz újból azonos eljárással cellulózporon kromatografáljuk. Amikor vízzel telített butanollal előhívunk, egyenként 50 ml-es frakciókat választunk le és ezeket legföljebb 50°-os fürdőhőmérsékleten végzett nagyvákuumos bepárolás után a Keller-féle színreakcióval megvizsgáljuk. Emellett a következő felosztáshoz jutunk: Táblázat Maradék Keller-féle Frakciók száma mg színreakció 1— 7 1270 negatív 8—16 87 tiszta kék 17—20 79 negatív 21—30 1053 ibolya 31—43 758 negatív A 8—16 frakciók maradéka (87 mg) ezüstkarbonátos kezelés után, amint ezt az 1. példában leírtuk, 45 mg tiszta pszilocint ad. A 21—30 frakciók (1053 mg) az ezüstkarbonátos kezelés után 765 mg tiszta pszilocibint eredményeznek. A kultúraszűredékből a hatóanyagokat azonos eljárás segítségével kapjuk. Erre a célra a szűredéket vákuumban térfogatának mintegy egytizedére töményítjük. Tízszeres térfogatú metanollal kicsapunk, a kicsapott kísérőanyagokról leszűrünk, az oldatot vákuumban szárazra pároljuk és a maradékot tízszeres mennyiségű metanollal háromszor kivonjuk. A metanolkivonatok besűrített maradékát a fentiek szerint tovább feldolgozzuk. A kultúraszűredék 12 literéből 80 mg pszilocibint és 6 mg pszilocint nyerünk. Az egész hozam 845 mg pszilocibin és 51 mg pszilocin, mely a szárított gombaanyagra számítva 0,28%-nak, ill. 0,017%nak felel meg. .3. példa: Pszilocibin és pszilocin előállítása cubensis Earle színtenyészeteiből. Stropharia A következő tápoldatot állítjuk elő: Friss, világos sörcefrét komlóadalék nélkül vízvezetéki vízzel 6%-nyi szárazanyag-tartalomra felhígítjuk. Ennek az oldatnak minden literéhez az alábbi anyagokat adjuk: FeS04 -7H 2 0 0,0021 g ZnS04 -7H 2 0 0,0009 g Ca(N03 ) 2 1,0 g KH2 P0 4 0,0624 g MgS04 -7H 2 0 0,0624 g KCl 0,0312 g Agar-agar 2,0 g Ezt a tápoldatot a 2. példa szerint sterilizáljak és literenként Kambodzsából származó Stropharia cubensis Earle gomba szuszpenziójának 2 ail-ével beoltjuk. Ennek az oltási szuszpenziónak előállítása úgy történik, mint ahogyan azt a 2. példa a) pontjában ismertettük. Miután 52 napig sötétben 24°-on inkubáltattuk, 20 literes adagból 452 g szárított gombaanyagot nyerünk, vagyis 22,6 g-ot literenként. A hatóanyag előállítása a gombaanyagból a 2. példában közölt eljárás szerint megy végbe. A kitermelés 1083 mg tiszta kristályos pszilocibin és 45 mg pszilocin, ami a megszárított gombaanyagra vonatkoztatva 0,24% ill. 0,010% kitermelésnek felel meg. 4. példa: Pszilocibin és pszilocin előállítása természetes eredetű Psilocybe semperviva Heim et Cailleux gombából. Mesterséges tenyésztés útján Psilocybe semperviva Heim et Cailleux gombából természetes táptalajon (komposzton) nyert érett terméstesteket légáramban 30°-on kíméletesen megszárítunk. 32 g szárított terméstestet finomra őrölünk és szobahőmérsékleten egyszer 300 ml és háromszor külön-külön 150 ml metanollal minden esetben félóra hosszat kirázzuk. Az egyesített kivonatokat vákuumban szárazra pároljuk. A 8,3 g maradékot zsírtalanítás céljából négyszer külön-külön 125 ml petroléterrel és háromszor külön-külön 50 ml kloroformmal eldörzsöljük, mely utóbbi 10% etanolt tartalmaz. Az eredmény 6,5 g maradék. Ezt a maradékot 6 ml vízben oldjuk és az oldatot további kísérőanyagok kicsapása céljából 60 ml absz. etanollal lassan összeötnjük, minek következtében a hatóanyagok az oldatban dúsúlnak. A tisztítást hasonló módon még kétszer megismételjük. Az oldatokat dekantáljuk, egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot metanolban felfogjuk és az 1. példa szerint cellulózporon kromatografáljuk. Az így nyert hatóanyagokból ezüstkarbonátos kezeléssel a halogént kivonjuk. Átkristályosítás után 160 mg kristályos pszilocibint és 32 mg pszilocint kapunk, ami a szárított gombaanyagra számítva 0,5% ill. 0,1%-nak felel meg. 5. példa: Pszilocibin előállítása természetes Psilocybe caerulescens Murril var. Mazatecorum Heim gombából. A Psilocybe caerulescens Murrill var. Mazatecorum Heim gombának mesterséges tenyésztéséből természetes táptalajokon (komposzton) nyert érett terméstesteit kíméletesen megszárítjuk, majd a 7,3 g-ot kitevő megszárított gombaanyagot finomra őröljük és az 1. példa szerint metanollal teljesen kivonjuk. A kivonatokat egyesítjük és vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot az 1. példában ismertetett módon a hatóanyagok kinyerése céljából tovább feldolgozzuk. 14,6 mg tiszta pszilocibint kapunk, ami a megszárított gombaanyagra vonatkoztatva 0,2% pszilocibinnek felel meg. A feldolgozott gombamintából pszilocint nem kaptunk.
