147949. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszilocibin és pszilocin kinyerésére
4 147.949 hozzuk össze. Az emellett keletkező ragadós csapadékról a hatóanyag-tartalmú oldatot dekantálással leválasztjuk. A csapadékot ismét kevés vízben oldjuk és újból tízszeres mennyiségű absz. alkohollal kezeljük. Ezt a kicsapási műveletet a maradékkal még kétszer megismételjük. Az oldatokat egyesítjük és vákuumban beszárítjuk. 23,4 g szilárd maradékot kapunk, mely a hatóanyag egész mennyiségét tartalmazza. Cellulózoszlopon végzendő kromatografáláshoz a maradékot lehetőleg kevés, 50%-os metanolban oldjuk, az oldatot 80 g cellulózporral jól elkeverjük és az anyagot vákuumban megszárítjuk. Az ily módon szubsztanciával terhelt cellulózport olyan cellulózoszlopra visszük fel, amelyet úgy állítunk elő, hogy 700 g cellulózport vízzel telített, butanollal feliszapolunk. Vízzel telített butanollal folyamatosan előhívunk, amikor is egyenként 200 ml frakciókat választunk le és 10—16 mm Hg-oszlop nyomáson nagyvákuum 50°-ot meg nem haladó fürdőhőmérsékleten bepárolunk. Emellett a következő felosztáshoz jutunk: ima 1. Táblázat Frakciók szí ima maradék mg 1—14 2,170 15—34 6.660 35- 40 3.540 '"' 12,370~ Mintegy 11 g maradék az Keller-féle színreakció negatív pozitív negatív oszlophoz tapadva marad. A 15—34 frakciók, melyek összesen 6,660 g maradékot adnak, tartalmazzák a hatóanyagok egész mennyiségét. A hatóanyagokat kromatograíálással az alább leírt módon újból tisztítjuk. A 6,66 g maradékot lehetőleg kevés metanolban oldjuk és az oldattal 20 g cellulózport impregnálunk. Miután ez megszáradt, az így kapott port 600 g cellulózporból álló oszlopra visszük, melyet az előbbiek szerint előkezeltünk. Vízzel telített butanollal előhívunk, miközben egyenként 100 ml frakciókat választunk le, melyeket 10—16 mm Hg-oszlop nyomáson bepárolunk és a színreakcióval megvizsgálunk. Emellett a következő felosztáshoz jutunk: Frakciók száma l-__ g 9—17 18—21 22—31 32—45 A 9—17 (180 mg) frakciók maradéka ezüstkarbonáttal kezelve 90 mg tiszta pszilocint ad, amint azt az 1. példában ismertettük. A 2. táblázat szerinti 22—31 frakciók az 1. példa szerinti ezüstkarbonátos kezeléssel 619 mg tiszta pszilocibint szolgáltatnak, az 1. példának megfelelő tulajdonságokkal. A kultúraszűredékből a 2. Táblázat maradék Keller-féle mg színreakció 2950 negatív 180 tiszta kék 155 ' negatív 912 ibolya 1510 negatív hatóanyagokat ugyanazzal az eljárással nyerjük, mint amilyent a szkleróciákkal kapcsolatban ismertettünk. Erre a célra a kultúraszűredéket vákuumban térfogatának kb. egytizedére sűrítjük be. Tízszeres térfogatú metanollal kicsapunk, szűrünk és a maradékot tízszeres mennyiségű metanollal háromszor extraháljuk. A metanolkivonatok bepárlási maradékát a fent ismertetett módon további feldolgozásnak vetjük alá. A kultúraszűredék 10 literéből például 220 mg pszilocibint és "! 2 mg pszilocint nyerünk. 3. példa: Kultúra előállítása Tápoldatot a következőképpen képezhetünk: Friss, világos, nem komiózott sörcefrét vízvezetéki vízzel a szárazanyag-tartalom 4,0—4,5%-ára felhígítunk. Az oldat minden literéhez az alábbi kező anyagokat adjuk: FeS04 -7H ? 0 ZnS04 • 7H2 0 Ca(N03 )ü KH2 PCM MgS04 KCl Agar-agar 0,00209 g 0,00086 g 0.25 g 0,0625 g 0.0625 g 0,031 2.0 g Ezt a tápoldatot a 2. példa szerint sterilizáljuk és beoltjuk. Miután 24°-on 48 napon át inkubáltuk, 55 literes adagból 924 g olyan hozamot értünk el, amely szkleróciumokból és micéliumból (szárazanyagból) állt, vagyis literenként 16,6 g-t. Ebből a hatóanyagot a 2. példában ismertetett módszerrel nyerhetjük ki. Hozamok: a szárított gombaanyagra számítva 0,018% pszilocin és 0,12% pszilocibin. 4. példa: Kultúra előállítása Tápoldatot a következőképpen képezhetünk: Friss, világos, nem komiózott sörcefrét vízvezetéki vízzel a szárazanyag-tartalom 4,0—4,5%-ára felhígítunk. A zoldat minden literéhez az alábbi anyagokat adjuk: FeS04 -7H ? 0 0,00209 g ZnS04 -7H 2 0 0,00086 g Ca(N03 ) 2 1,0 g Agar-agar 2,0 g Ezt a tápoldatot a 2. példa szerint sterilizáljuk, beoltjuk és ínkubáljuk. 48 nap elteltével a tápoldat minden litere után 20,5 g szárított szkleróeiumokat és micélrumot gyűjtöttünk össze, amelyekből a hatóanyagokat a 2. példában ismertetett módszerrel különítjük el. Hozamok: a szárított gombaanyagra számítva 0,011% pszilocin és 0,14%, pszilocibin. 5. példa: Kultúra előállítása Tápoldatot a következőképpen állítunk elő: Friss, világos, nem komiózott sörcefrét vízvezetéki vízzel a szárazanyag-tartalom 4,0—4,5%-ára hígítunk fel. Ennek az oldatnak minden literére* az alábbi anyagokat adjuk:
