147949. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszilocibin és pszilocin kinyerésére
147.949 a FeSÜ4 • 7H20 ZnS04-7H 2 0 KH2PO4 Agar-agar 0,00209 g 0,00086 g 0,25 g 2,0 g A további feldolgozás a 2. példa szerinti módon megy végbe. A hozam a tápoldat minden literére 48 nap után 15,9 g szárított szkleróciumok és micélium. A hatóanyagok elkülönítését úgy végezzük, mint ahogyan azt a 2. példában ismertettük. Hozamok: a száraz gombaanyagra számítva 0,02% pszilocin ós 0,11% pszilocibin. 6. példa: Kulíára előállítása Tápoldatot következőképpen állítunk elő: Friss. világos, nem komiózott sörcefrát vízvezetéki vízzel a szárazanyag-tartalom 4,0—4,5%-ára felhígítunk. Az oldat minden literéhez az alábbi anyagokat adjuk: FeS04 -7H 2 0 0,00209 g ZnS04 -7H 2 0 0,00086 g Kukoricalekvár konc. 20,0 g Agar-agar 2,0 g A további feldolgozás a 2. példa szerint történik. A hozam 48 nap után a tápoldat minden literére szárítót szkleróciumokból és mioéliumbó] összesen 29,8 g. A hatóanyagokat a 2. példában ismertetett módon különítjük el egymástól. Hozamok: száraz gombaanyagra számítva 0,012%) pszilocin és 0,22% pszilocibin. 7. példa: Kultúra előállítása Tápoldatot következőképpen állítunk elő: malátakivonat 45 g FeS04 -7H 2 0,00417 g ZnS04 • 7H2 0 Vízvezetéki víz 0,00172 g 1000 ml A tápoldatot autoklávban 25 perc hosszat 108°-on sterilizáljuk. Az oldat 1 literét a Psiloeybe mexicana gomba 10 ml szuszpenziójával beoltjuk. Ennek az oltószuszpenziónak előállítása a 2. példa szerint történik. A beoltás után ezt a gombát mozgatott merítőeljárással 24°-on tenyésztjük. Szágószerű micéliumgolyók képződnek, mint amilyenek alacsonyrendű gombák merítőeljárásos tenyésztésénél ismeretesek. A micéliumot 30 nap után szűréssel leválasztjuk; hozamként 7,0 g száraz micéliumot kapunk a tápoldat minden litere után. 430 g megszárított, finomra őrölt micéliumot fél óra hosszat 4,5 liter 80%-os vizes etanollal szobahőmérsékleten rázunk. A maradék szűrése után azt még háromszor azonos módon kivonatoljuk. Az egyesített kivonatok sűrítményét (41 g) egymás után kétszer 500 ml petroléterrel, kétszer 400 ml kloroformmal és kétszer 200 ml acetonnal kivonatoljuk a ballasztanyagok eltávolítására. 25 g vízben oldható por marad,' melyet 25 ml vízben oldunk. Az oldatot alapos kavarás közben A kiadásért felel: a Közgazdasági 250 mi acetonnal hozzuk össze majd a csapadékot a folyadéktól elválasztjuk, a csapadékot ismét kevés vízben oldjuk és újból tízszeres mennyiségű acetonnal kicsapatjuk. Ezt a műveletet az acetonban oldhatatlan résszel még kétszer megismételjük, aminek következtében a hatóanyag egész mennyisége a víz-aceton kivonatokba megy át. Ezeket alapos kavarás közben besűrítjük és a maradékot (9,8 g) a 2. példa szerint kromatografálással cellulózoszlopon tovább felosztjuk. Kétszeres kromatografálás után 32 mg kristályos psziiocint és 225 mg pszilocibint kapunk, ami 0,007 ill. 0,05% hozamnak felel meg a száraz micéliumra vonatkoztatva. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás pszilocibin és pszilocin kinyerésére, azzal jellemezve, hogy Psilocybe mexicana. Heim gombából vagy mesterségesen tenyésztett gombaanyagból — melyet úgy kaptunk ennek a gombának színtenyészteiből vagy biológiai variánsaiból vagy mutációiból, hogy ezeket természetes vagy mesterséges táptalajokon beoltjuk, majd ezeket a kultúrákat napvilágnál vagy sötétben 18—27 C° közötti állandó hőmérsékleten inkubáljuk, a hatóanyagokat ismert módszerek segítségével kivonatoljuk, tisztítjuk, egymástól elkülönítjük és adott esetben a halogéntől megszabadítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, aktív gombaanyag (terméstestek) kinyerésére, azzal jellemezve, hogy a gombákat természetes szubsztrátumon tenyésztjük és a kultúrákat 18— 27 C° közötti állandó hőmérsékleten napvilágon inkubáltatjuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, tetemesebb mennyiségű gombaanyag (micélium és szkleróciák) kinyerésére, azzal jellemezve, hogy a gombákat in vitro olyan malátakivonatból álló mesterséges táptalajon tenyésztjük, amelynek szárazanyag-tartalma a gomba milyenségétől függően 4—10% koncentrációjú, a tápoldathoz literenként 0,0004—0,0010 g vas(II)iont és literenként 2 g agar-agart adunk és a kultúrákat 22—26 C° közötti állandó hőmérsékleten sötétben inkubáltatjuk. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja pszichotrop hatású vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy a zsírtalanított gombaanyagot vízzel vagy vízben elkeverhető szerves oldószerrel kivonatoljuk, a kivont maradék vizes oldatából vízben elkeverhető szerves oldószerrel frakcionált kicsapatás útján az inaktív kísérőanyagokat leválasztjuk és a szűredékben kapott hatóanyagokat abszorpció útján cellulózporon és eluálás útján, vízzel telített butanollal egymástól elkülönítjük. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja tiszta pszilocibin és pszilocin kinyerésére, azzal jellemezve, hogy a kapott halogéntartalmú hatóanyagokat szétbontásuk előtt vagy után ezüstkarbonátos kezeléssel ismert műveletek útján a halogéntől megszabadítjuk. és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 603591. Terv Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21-23.
