147627. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamin és a hasznosítható B12 vitaminszerű faktorok egyidejű kinyerésére, ezeket tartalmazó koncentrátumokból
2 147.627 a pH-értékek megfelelő megválasztása útján nagymértékben specifikussá tehető az egyes faktorok elkülönítése szempontjából. Ha ugyanis a kiinduló anyagul szolgáló vizes B12-konoentrátumot, amely a Bi2-vitamiin mellett igen számottevő mennyiségű F III. faktort és etiokobalaminkarbonsavat, valamint ezeken kívül eltávolítandó kísérőanyagként még E-faktort, B-faktort, X-faktort, A-f aktort és egyéb szennyezéseket is tartalmaz, 4,5 körüli pH-értéken 15—20 tf.% 1 : 6 arányú fenolkloroform, oldattal rázzuk ki, akkor a nem kívánatos és az eddig ismert elválasztási . műveletek során erősen zavaró E-faktort gyakorlatilag teljesen és az ugyancsak kiküszöbölendő B-faktort is jórészt eltávolíthatjuk a kiinduló anyagból. Ha ezután a nem kívánatos kísérő anyagok jelentős ós legzavaróbb részétől mentesített vizes koncentrátumot 8,5 körüli pH-értékre lúgosítjuk és 1 : 5 arápyú fenol-kloroform oldattal rázzuk ki, akkor a Bi a-vitamin az oldószeres fázisba megy át. Átmegy ugyan az oldószeres fázisba ugyanekkor az F III. faktor egy kis része is, de ez ugyanilyen pH-értékű vízzel specifikusan kimosható az igen túlnyomó részében az oldószeres fázisban maradó B12-VÍtanún mellől. Az így kezelt és elkülönített oldószeres fázist — amely az eredeti vizes koncentrátum összes Bi2-vitamintartalmának legalább 90%-át tartalmazza — vetjük azután alá a jelen találmány értelmében a törzsszabadalom szerinti további eljárásnak (alumíniumoxidos adszorpció és eluálás), amikor is a fent említett követelmények teljesen megfelelő, tiszta, kísérő faktoroktól igen messzemenően mentesített kristályos Bi2-vitaminhoz jutunk. A fenti elválasztási műveletek során a B-vitamin csekély része és az ugyancsak értékes F III. faktor kisebb része az eltávolított oldószeres ill. a mosásra felhasznált vizes fázisokba került. Ezek sem vesznek kárba, mert visszanyerésük megoldható oly módon, hogy az első oldószeres kivonatolás (1 : 6 fenol-kloroform, pH = 4,5) elkülönített oldószeres fázisát ugyanilyen pH-értékre beállított desztillált vízzel mossuk át, amikor is az itt levő Bi2-vrtamin és az értékes faktorok a vizes fázisba mennek át, míg az értéktelen E-faktor és B-faktor a kiselejtezésre kerülő oldószeres fázisban maradnak. Az itt kapott mosóvízben, valamint a második szerves oldószeres kirázás (1:5 fenol-kloroform., pH = 8,5) fentebb említett mosóvizében levő Bi2-vitamin és jórészt az F III. faktor is 1:5 arányú fenol-kloroform oldattal, 8,5 körüli pH-értéken vonható ki ezekből a mosóvizekből; az így kapott B^-vitamint és. F III. faktort tartalmazó, 1:5 arányú fenol-kloroform oldatot azután kirázó oldószerként használhatjuk fel egy következő gyártási műveletben. . A jelen találmány szerinti eljárás azonban nemcsak a minden kísérő faktortól gyakorlatilag mentes Bi2-vitaimin előállítására alkalmas, hanem egyszersmind alkalmas az említett további két értékes kísérő' faktor, az F III. faktor és az etiokobalaminkarfoonsav tiszta állapotban történő kinyerésére ill. értékesítésiére is. Ez a két értékes faktor a fentiekben leírt elválasztási műveletek után (a következő gyártásba tovább viendő fent említett 1 :5 arányú fenol-kloroform oldattól eltekintve) nagyrészt a kiinduló vizes koncentrátumba.n, kisebb részében pedig az eddigi műveletekből származó mosóvizekben van jelen. Ezeknek az értékes faktoroknak a kinyerése a találmány értelmében oly módon történik, hogy előbb a használt mosóvizeket 4,5 körüli pH-értékre savanyítjuk és 1:2 arányú fenol-kloroform oldattal kirázzuk őket, amikor is a mosóvizekben jelenvolt F III. faktor és etiokobalaminkarbonsav az' oldószeres fázisba mennek át, majd ezzel a különválasztott oldószeres fázissal rázzuk össze a B-vitamin kinyerése után. a visszamaradt és lúgosán hagyott eredeti vizes koncentrátumot, amikor is az ebben jelenlevő F III. faktor az oldószeres fázisba 'megy át, viszont az. oldószeres fázis etiokobalaminkaríbonsav-tartalma visszamegy a lúgosán hagyott vizes koncentrátumba. Az oldószeres fázist ezután különválasztjuk és a törzsszabadalom szerinti további eljárásnak (alumíniumoxidos adszorpció és eluálás) vetjük alá; az eluátumból így tiszta F III. faktort kristályosíthatunk ki. A vizes koncentrátum viszont már csak az etiokobalaminkarbonsavat tartalmazza az értékes alkotórészek közül; ennek hasznosítása céljából a vizes oldatot semlegesítjük, majd mentesítjük a fenoltól és az így kapott etiokobalaminkarbonsav sűrítményt a 146.379 lajstromszámú magyar szabadalom szerinti módon dolgozzuk fel, az etiokobalaminkarbonsavnak Bi2-vitamin;ná való bioszintetikus átalakítása céljából. A fentiekben a találmány szerinti eljárás alapelveit és lényeges lépéseit ismertettük. Ennek az elválasztási eljárásnak .a hatásfoka — az egyes kivonási ill. szétválasztási műveletek szelektivitása és teljessége — 'még jelentős mértékben növelhető, ha az egyes, műveletek során a fázisok mennyiségi arányai, a kirázások megismétlése és egyéb műveleti fogások terén a kísérletileg megállapítható optimális feltételek betartásával dolgozunk. Ezek az optimális feltételek természetesen a feldolgozandó kiinduló koncentrátum ok adott összetételétől és egyéb helyi 'adottságoktól is függnek. A találmány szerinti eljárás egy célszem, üzemi tapasztalataink szerint igen előnyös kiviteli alakját az alábbi gyakorlati példa szemlélteti részletesebben. Melasz hozzáadásával folytatott magas szintű methanobaktériumos fermentáció' (lajstr. sz.: 144.237) termékéből, a 144.197 lajstromszámú és a 143.197 lajstromszámú magyar szabadalmakban ismertetett módon, olyan koncentrátumot állítottunk elő, mely 16 literben tartalmaz, 100 g Bjyvitamint, 70 g BI2 — F III. faktort (5-hidroxibenzimidazolocianokobamid), 30 g etiofcobalaminkarbonsavat, 9 g B-faktort (etiokobaiamin, a B-vitamin nucleotida nélküli fragmense), kib. 3—4 g X-faktort (Bi2 desamidált, monokarbonsav származéka), továbbá kb. ugyanilyen mennyiségben az ismeretlen összetételű ,,E-faktort" és némi A-faktort (2-metil-adenino-ci.anokobamid). Az oldat sötét lilásvörös színű, szerves oldószernyomokat nem tartalmaz, szárazanyagtartalma 2,8%, tehát a tiszí hatóanyagtartalom \ tasági foka : -100 \,szerves szarazanyagtartalom ) közel 50%-os. A feladat az, hogy ebből a keverékből veszteségmentesen előállítsuk a Bi2 -vitamint USP XV.
