147566. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikrobiológiailag hatásos polipeptid származékok sóinak előállítására

O Megjelent: 1960. október 1. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 147.566. SZÁM 12. q. 1—13. OSZTÁLY — Cl—275. ALAPSZÁM Eljárás mikrobiológiailag hatásos polipeptid származékok sóinak előállítására Chinoin Gyógyszer és Vegyészeti Termékek Gyára, Rt, Budapest Feltalálók: dr. Kovács Kálmán oki. vegyészmérnök, Budapest 45%, Kótai András oki. vegyész, Budapest 30%, dr. Szabó István orvos, Budapest 25% A bejelentés napja: 1958. június 5. A találmány értelmében gyógyászati szempontból igen előnyösen felhasználható termékek állíthatók elő, oly módon, hogy diaminoknak aminodikarbonsavakból felépített polipeptid-polikarbonsavakkal ill. a polipeptid-polikarbonsav-Kzármazékokkal történő acilezésekor keletkező termékeket vízben oldjuk, majd a vizes oldatból dializis segítségével eltávolítjuk a kidializálható anyagot. Ezen módszer segítségével szennyeződésektől kielégítően tisztított minőségű mikrobiológiailag hatásos amidált peptidszármazékokat nyerünk. Az eljárás kiindulási anyagaként olyan amidáit peptidszármazékokat használhatunk, amelyeket célszerűen alifás amino-dikarbonsavakból felépült polipeptid-polikarbonsavakból (ül. savszármazékokból) és alifás diarninokból (alkil, mono- vagy dihelyettesített, nem helyettesített, vagy ezek keveréke) készítettünk. Ezen polipeptid-amidok előállításakor célszerűen legalább 5 molekula diamint reagáltatunk egy-egy karbonsav csoporttal. A dializis előtt a bázisos peptidszármazékot célszerű sóvá alakítani. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy a polipeptid-származékot bázikus alakjában dializáljuk és az így tisztított terméket alakítjuk sóvá. A sóképzés általában a polipeptid-származéknak megfelelő szerves vagy szervetlen savban való oldásával történhet. Ilyen módon a sósavas, kénsavas, salétromsavas, hangyasavas, ecetsavas, glukonsavas, ftálsavas stb. sók állíthatók elő. A dialízissel tisztított bázisos polipeptid származék oldatát lioíilizálással szilárd alakba hozhatjuk. A fenti módon előállított bázisos polipeptid származékok sói igen alkalmasak váladékos fertőző felületi sebek gyógyítására, amelyeket ilyen anyagokkal tamponálhatunk vagy kenhetünk. Példák: 1. 8 g finoman porított a-poli-L-glutaminsav-y-rnetilésztert 50 ml etiléndiaminmonihidráttal 134 C°-on 1 órán át melegítünk, az etiléndiamin felesleget vákuumban lepároljuk, a maradékot tömény kénsav felett szárítjuk, majd 4%-os sósavban oldjuk és azután csapvízzel, majd desztillált vízzel szemben dializáljuk, majd a dializálással tisztított bázisos polipeptidet tartalmazó oldatot az esetleges oldhatatlan részek elávolítása után liofilizáljuk. Ily módon mintegy 50%-os kitermeléssel kapjuk a kívánt bázisos poliglutaminsav származékot. E vegyület 5 y/ml koncentrációban gátolja a staphylococcus Wood-törzs, 20 y/ml koncentrációban a Bact. subtilis növekedését. H37RV —tbc— tenyészettel fertőzött tengeri malacokra kifejtett gyógyító hatása az INH-val azonos nagyságrendű „per os" vagy „subcutan" adagolás hatására. 2. 4 g finoman porított a-poli-L-glutaminsav-y-metilésztert 20 ml vízmentes putreseinnel 1 órán át forralunk. A putrescin felesleget vákuum-desztillálással eltávolítjuk. Az anyagot kénsavas exiccatorban szárítjuk, majd híg sósavas oldatát dializáljuk és végül liofilizáljuk. Mintegy 50%-os kitermelést kapunk. 3. 7,2 g DL-anhidropoliasziparaginsavat 24 ml vízmentes etiléndiarninban oldunk, 60—70 C°-ra melegítjük másfél órán át. A reakcióelegyből az etiléndiamin felesleget vákuumban lehajtjuk, a maradékot tömény kénsav felett szárítjuk, híg só£*ivban oldjuk és 24 órán át dializáljuk. A vizes oldatot kis térfogatra vákuuban bepároljuk, majd liofilizáljuk. 4 g sárgás barna amorf anyagot kapunk, mely vízben jól oldódik, nedvszívó. 100 y/ml koncentrációban a (staphylococcus Woodtörzs és Bact. sutbilis növekedését gátolja. 4. 0,5 g y-poli-D-glutaminsiav-ff-metilésztert 3 ml etiléndiarninban oldunk. Néhány napig szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután az etiléndiamint vákuumban lehajtjuk és kénsav meg foszforpentoxid felett szárítjuk. 5 ml 4%-os sósavval oldjuk és az oldatot desztillált vízzel szemben dializáljuk. Dializis után az oldatot liofilizáljuk. 100 mg fehér amorf anyagot kapunk mely vízben jól oldódik. 5. 10 g «-poli-L-glutaminsav-y-metilésztert 30 ml N,N-dietilaminoetilaminnal 140—160 C°-on forralunk 3 órán át. Lehűlés után a reakcióelegyből az aminfelesleget éterrel kioldjuk. A kiváló fehér porszerű anyagot éterrel többször átmossuk, majd