146380. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagytisztaságú kristályos bilirubin előállítására

tf Megjelent: 1960. március 15. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 146.380. SZÁM 12. p. OSZTÁLY — Rí—190. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY Eljárás nagytisztaságú kristályos bilirubin előállítására Richter Gedeon Vegyészeti Gyár Rt., Budapest Feltalálók: Orosz Ferenc és dr. Thiele Kurt kutató vegyészek, budapesti lakosok A bejelentés napja: 1958. augusztus 28. A bilirubin előállítása epéből és epekőből egyaránt régen ismeretes. Az epében levő bilirubin alatt a távolabbiakban természetes bilirubint értünk, amely mint az újabb kutatásokból ismeretes, direkt és indirekt bilirubinból áll. A direkt bilirubin a két bázisú bilirubin észterének és sójának elegye, míg az indirekt bilirubinban csak szabad karboxil-csoportok találhatók. (L. Takeshi Sakamoto, Acta Med. Okayama 10, 11—29, 30—46 [1956]). A komponensek aránya az epében annak eredetétől függően változó. Az ismert eljárások egyik csoportja szerint a bilirubint, az epe lúgos hidrolízise után, enyhén savanyú közegben, extrakciós módszerekkel izolálják. Az eljárások egy másik csoportja szerint a bilirubint kisvolumenű fázisba viszik át, pl. akként, hogy kálciumhidroxiddal létesített csapadék alakjában elkülönítik és a továbbiakban ezt a csapadékot dolgozzák fel úgy, hogy a kísérő ballasztanyagokat alkoholos-éteres digerálással elkülönítik, majd a bilirubint a csapadékból savas kezelés után, oxigén kizárása mellett, valamely oldószerével, pl. halogénezett szénhidrogénnel forrón közvetlenül kioldják. Ilyen és ezekkel analóg eljárásokat ismertetnek a 2 049134, 2 166 073, 2 331 574, 2 363 471 és 2 386 716 sz. amerikai szabadalmi leírások. Ismeretes továbbá a gyakorlatból, hogy a friss vagy tartósított epéből sósavval kapott csapadékból, mely a bilirubin mellett kolesztrint, epesavakat és egyéb epekomponenseket tartalmaz, a bilirubint kísérő' anyagokat több lépcsőben éteralkoholos digerálással távolítják el, majd a bilirubin tartalmú maradékot szerves savval hidrolizálják és az alkoholos közegben ammóniával oldatba vitt bilirubint savval kicsapják. A vázolt korábbi eljárásoknál a kitermelések reprodukciós kísérleteink szerint 3,5—15,0 g bilirubin között ingadoznak 50 kg sertésepére számítva. Az irodalmi eljárások között a legmagasabb kitermelést a 2 363 471 sz;. amerikai leírásban ismertetett eljárás adja (16,5 g/50 kg epe), amelynél az epe kinyerése előtt az egész epét lúgos hidrolízisnek vetik alá. Ilyen kitermelési értékek voltak elérhetők a sósavas csapadék feldolgozásával is. E két utóbbi eljárás eredményéből okszerűen következik, hogy a direkt bilirubin lúgos vagy savas hidrolízisével a kitermelés növekszik. Ezeknél az eljárásoknál is a viszonylag magas kitermelések mellett azonban a gyakorlatban nagy kitermelés-ingadozások tapasztalhatók. Azt találtuk, hogy hasonló vagy még nagyobb átlag-nyeredékértékek érhetők el akkor is, ha a szokásos módon tartósított epéből sósavval ismert módon pH 2 körül leválasztott és izolált bilirubin tartalmú nyers csapadékot a ballasztanyagoktól való előzetes megtisztítás nélkül, antioxidáns anyagok jelenlétében, közvetlenül a bilirubin valamely oldószerével forrón kivonatoljuk és az oldószer lepárlásakor visszamaradt anyagból a most már lényegesen csökkent mennyiségű kísérő anyagokat utólag választjuk le. Ezzel főleg a ballasztanyagoktól való megtisztítás lényegesen leegyszerűsödik. Így bizonyos bilirufoin-veszteségek kiküszöbölődnek, a kitermelés-ingadozások is P1-maradnak, sőt az irodaiamban közölt, ill. a reprodukálható nyeredékértékeknél általában magasabb kitermelések érhetők el, pl. 20—22 g pro uso seientifieó tisztaságú kristályos bilirubin 50 kg sertésepére számítva, szemben az irodalomban ismertetett legjobb, 16,5 g-os ismeretlen tisztasági fokú kitermeléssel. Eljárásunk további előnye, hogy oldószerszükséglete mind a kivonatolásnál, mind a tisztításnál alacsonyabb, mint az említett módszereiké. A találmány lényege tehát kísérleteink tapasztalata szerint az, hogy a savas csapadékot használjuk kiindulási anyagként, amelyben a bilirubin teljes egészében megtalálható. Ez a csapadék a bilirubint kísérő és szennyező epe komponenseket (koleszterin, epesavak stb.) azonban már csak rész-