143583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az I-, II- és III-szpiramicin elkülönítésére
4 143.583 benzolt használunk, melyet az első oldathoz adunk; a benzolos kivonat teljes térfogatát 150 cm3 -re töltjük fel. Mindegyik benzolos oldat egy alikvot részében megállapítjuk a szárazanyagtartalmat és megrajzoljuk azt a görbét, amely mindegyik cella szárazanyag-tartalmának koncentrációját tünteti fel. Három koncentrációs maximumot kapunk, amelyek a három összetevő szerinti megoszlási hányadosnak felelnek meg: III. Táblázat Koncentrációs Megoszlási hányados = maximumot _ benzolos fázis koncentrációja adó cella vizes fázis koncentrációja A termék 11. K/ = 0,22 B termék 25. • K/z = 0,71 • C termék 37. Km =1,6 A megoszlás kísérleti görbéjének összehasonlítása a talált megoszlási hányadosok szerint számított görbével azt mutatja, hogy az összetevők tisztán vannak jelen azokban az oldatokban, melyeket az alábbi cellák tartalmaznak: A termék az, 5-től 15-ig terjedő cellákban, B termék a 21-től 28-ig terjedő cellákban, C termék a 35-től 45-ig terjedő cellákban. Ezután összegyűjtjük azokat a benzolos keverékeket, amelyek ugyanazt az összetevőt tisztán tartalmazzák, majd az oldószert csökkentett nyomáson lepárlással kiűzzük és a desztillációs maradékot vákuumban megszárítjuk (6 óra — 40 C° — 1 mm). A kapott eredmények: A termék: 7,8 g ^ B termék: 2,9 g C termék: 3,4 g. Az A terméket vákuumedényben állandó súlyig szárítottuk (12 óra — 40 C° — 1 mm). E termék a következő tulajdonságokat mutatja: Összetétel: C% = 60,3: H% = 8,7; 0% = 28,5; N% = 3,3. Olvadási pont (Maquenne blokk) = 134—137 C° [«]D -'o (c = 10/0; metanol) = —96° Ultraibolya színkép (etanolban oldva) abszorpciós maximum 232 m/x hullámhosszon fE I%_ = 322 V 1 cm Ezek az állandók az I-szpiramicinnek felelnek meg (I. táblázat). 1. sz. Whatman-papiron kromatografaltunk, amikor is a papírt 9 pH értékű pufferoldattal itattuk át (P04HNa2, I2H2O — 1 literre 23,8 g), mely oldószer a 85:15:25 térfogatarányú ciklohexán-metilizobutilketon-víz rendszernek könynyű fázisa. Leszálló módszert alkalmazva, a futtatási idő 4 óra volt 25 C°-on. A kromatografia egyetlen termék jelenlétét mutatta, melynek Rf értéke =0,04, és amelyet a B. subtilis csíráival beoltott zselatinlemezen azonosítottunk. 2 g I-szpiramicin-bázist úgy alakítunk át^szulfáttá, hogy a bázist 5 cm3 metanolban oldjuk, és az oldatot a metanolhoz adott hígított kénsavoldattal 5,5 pH értékre állítjuk be. A sót oly módon csapjuk ki, hogy a metanolos oldatot kavarás közben 250 cm3 vízmentes éterhez adjuk. A csapadékot centrifugáljuk és megszárítjuk. A nyert szulfát súlya: 1,95 g. SÖ4% 10,0 [a]D *> ( C = 2 o/ 0) víz): —73 ± 1°. Azonos módszerrel más sókat is előállíthatunk, mint amilyenek pl. klórhidrát, nitrát, perklorát, ftalát. A B termékből 2 g-ot 4 cm3 forrásban levő benzolban oldunk, az oldatot +10 C°-ra lehűtjük és 15 óra állatás után a kapott kristályokat lecentrifugáljuk, 0,2 cm3 benzolban mossuk és megszárítjuk. Ilyképpen 1,57 g kristályos terméket nyerünk, mely 129—132 C°-on olvad. Azonos feltételek 'mellett végzett második kristályosítás olyan termékhez vezet, amelynek olvadás-i pontja 130—133 C° és amelynek tulajdonságai a következők: Összetétel: C% = 61,6; H% = 8,5; 0% = 26,8; N% = 3,1. [«]D20 (c=l%, metanol): —86°. Ultraibolya színkép (etanolban oldva) abszorpciós maximum 232 m/x hullámhosszon (E i!ű!_ = 307] V 1 cm J Ezek az állandók a Il-szpiramicinnek felelnek meg (I. táblázat). ' Az I-szpiramicin kromatograf iá jávai azonos feltételek mellett végzett papirkromatografia egyetlen, termék jelenlétére utal, melynek jellegzetessége, hogy Rf = 0,15. 2 g Il-szpiramicin-bázist átalakítunk szulfáttá. A nyert szulfát súlya: 1,9 g SO4O/0: 9,8 [*]D20 (c = 20/0, víz): —72 ± 1°. A C termékből 3 g-ot 6 cm3 forrásban levő benzolban oldunk, az oldatot +10 C°-ra lehűtjük és 15 óra állatás után a keletkezett kristályokat lecentrifugáljuk, 0,3 cm3 benzolban mossuk és megszárítjuk. Ilyképpen 1,9 g kristályos terméket - kapunk, mely 127—130 C°-on olvad. Azonos feltételek mellett foganatosított második kristályosítás olyan terméket' ad, amely 128—131 C°-on olvad,és amelynek jellegzetes tulajdonságai a következők: •Összetétel: C% = 61; H% = 8,5; 0% = 26,7; N% = 3,0.. . [a]D 2o (c =.io/ 0) metanol): —83° Ultraibolya színkép (etanolban oldva) abszorpciós maximum hullámhossza 323 m/x-Ezek az állandók a Ill-szpiramicinnek felelnek meg (I. táblázat). Az I-szpiramicin kromatograf iá jávai azonos feltételek mellett végzett papirkromatografia
