142183. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására

142.183 9 Mjszínü tömör anyag alakjában, erythromycinkomplexet kapunk. Ez utóbbit igén kis mennyiségű etanolban feloldjuk, majd vizet adunk hozzá, míg az toldat zavarossá nem válik. A zavaros oldatot, hűtőben, kb. 48 óráig hűtjük, amikor is a komplexet kristályalakban kapjuk. A nyerskristáiyokat, a fent ismertetett módon, alkohol és víz «legyéből, majd vizes acetonból kétszer átkristályosítjuk. Az így kapott anyag lényegében tiszta érythromycin-komplex, mely kb. 82—83 C°-on olvad. • U. Példa. Erythromy cin-komplex előállítása rázólombikban, Streptomyces erythreus, M5—12559 törzs sarjadzott tenyészetét létesítjük, oly módon, hogy a mikroszervezeteket nutriens agar-rézsün szaporítjuk. A spórákat vizes szuszpenzió alakjában úgy nyerjük ki, hogy a rézsűre kismennyiségű vizet bocsátunk és a spórákat a rézsű felületéről enyhén lekaparjuk. Az ily módon kapott spóra-szuszpenziónak kb. 1 cnr-ét használjuk fel a következő összetételű tenyésztő anyagba való beoltására: Glukóz 1.5 g Szójábab-dara 0.5 g Kukoricafőzet szilárd anyaga 0.5 g Nátriumklor.id^ 0.5 g Kalciumkarbonat 0.2 g Víz 100 cm3 Az oltott tenyésztő közeget kb. 48 óráig, kb. 27 <C°-on inkubáljuk, míg jó vegetatív gyarapodás észlelhető. A vegetatív szaporulatot tartalmazó tenyésztő közeget tíz egyenlő részre osztjuk és a részlegeket tíz 1 literes Erleumeyer-lombik beoltására használjuk fel, mely lombikok mindegyike kb. 200 «m3

alábbi összetételű, sterilizált erjesztő tenyészközeget tartalmaz. Keményítő 30 g Szójabab-dara 30 g Kukoricafőzet szilárd anyaga 10 g Nátriumklorid 5 g Kalciumkarbonát 2g Víz 2 liter A beoltott tenyésztő közeget tartalmazó lombiko'Jcat kb. 28 C°-on tartott inkubációs térben helyezzük el és kb. 80^90 óráig ide-oda mozgó, oly rázó1 berendezésben rázzuk, melynek lökete 5 cm és mely percenként 114 teljes elmozdulást végez. A tenyésztő közegből időnként próbákat veszünk, hogy megállapítsuk az azokban foglalt antibiotikus hatékonyság mérvét. Amikor az antibiotikus hatékonyság eléri a 200 mcg-t/cm3

közeg, akkor a rázó lombikokban foglalt tenyésztő közegeket egyesítjük és .az egyesített közeget, a mreelhmreltávolítása céljából, megszűrjük. Az antibiotikus hatékonyságot a tenyésztő közegből erybhromycin-komplex alakjában nyerjük; ki oJy módon, hogy a közeget kétszer ,«gyenlő térfogatú butanollal extraháljuk és a buta.iiolt vákuumban kihajtjuk. A visszamaradó, szilárd -erythromycin-komplexet vizes acetonból való több szőrös átkristályosífással tisztítjuk. 5. Példa. Erythromy cin-komplex tisztítása szénadszorpció útján. 1 1 szűrt tenyésztő anyagot, melyet a 4. példában ismertetett módon a rázólombik-módszerrel kaptunk, 2 g savval kezelt, a célszerűen Norit SG-jeiű aktívszénnel kezelünk. Ez utóbbit úgy kapjuk, hogy a szenet, száraz súlyának ötszörösét kitevő 5%-os ecetsavval 15 percig kavarjuk, a szenet leszűrjük és szárazsúlyának 25-szörösét kitevő vízzel mossuk. A szén és tenyésztő anyag elegyét kb. y, óráig kavarjuk, a szenet leszűrjük és 500 cm3

vízzel mossuk. Az aktív szenet az erythromycin kimosása céljából, 50*0 cm3 butanollal kavarjuk. A keveréket a szén eltávolítása céljából, szűrjük és a komplexet tartalmazó szürletből a vizet az eotroposan kiűzzük, míg teljesen meg nem szárad. Az erythromyeinkomplex-maradékot, vizes etanolból való átkristá lyosítással tisztítjuk. 6. Példa. - Ttryhromycin-komplex tisztítása kromatográfiai úton. Nyers erythromycint, amilyent a tenyésztő anyagnak, a 3. példa szerint, etilacetátos kivonatolása útján kaptunk, benzolban feloldunk, még pedig 5 era benzolra kb. 200 mg nyers komplex arányában. A benzololdatot szilikagel-oszlopon átvonultatjuk. Az oszlop méretei: kb. 18X275 mm. Az oszlopot 15'% metanolnak benzolos oldatával mossuk, barnaszínű inaktív anyag eltávolítása céljából. A komplexet az oszlopból metanollal kimossuk. A metan^los mosóoldatot, vákuumban, száradásig bepárologtatjuk és az erythromycin-komplexet tartalmazó maradékot; melynek tisztasága a 90%-ot is meghaladja, vizes acetonból való átkristályosítással tisztítjuk. 7. Példa. Erythromycin előállítása rázólombikokban. Antibiotikus aktivitású tenyészti) anyagot készítünk a 4. példában ismertetett módon. A tenyésztő közegben foglalt antibiotikus hatékonyságot erythromycin alakjában a következő módon nyerjük ki: A tenyésztő közeget, nátriumhidroxid 'hozzáadásával, kb. pH 9.8 eléréséig, lúgossá tesszük, majd 2!

A térfogatrész etilacetáttal extraháljuk. Az erythromycint tartalmazó egyesített etilacetát-kivonatokat két egyenlő térfogatú rész vízzel, melyet kb. pH =-<5-ig kénsavval megsavanyítottunk, eztraháljuk. A vizes kivonatokat egyesítjük és az egyesített kivonaítok pH-ját, nátriumhidroxiddal, kb. 7,-re állítjuk be. A közömbösített oldatot eredeti térfogatának kb. 1/10-ére a kezdődő, kicsapódásig besűrítjük. A vizes elegyet nátriumhidroxid oldat hozzáadásával, kb. pH 9-re állítjuk be és néhány óráig hidegben állni hagyjuk. A kivált erythro1

mycint leszűrjük és vizes etanolból átkristályosíljuk. 8. Példa. Erythromycin tisztítása kromatográfiai úton. Az 1. példában megadott módon, szűrt tenyésztő anyagnak amilacetáttal való extrahálása és az'amit-