142183. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikumok előállítására
8 142.183 percig tartó főzéssel sterilizáljuk. A sterilizált tenyésztő anyagot lehűtjük és Streptomyces erythreus M5—12559 törzs spóráival aszeptikusán beoltjuk. A szervezetet a tenyésztő anyagban kb. 26 C°-on 45 óráig szaporítjuk. A szaporítási idő alatt a tenyésztő anyagot kavarjuk és steril levegővel szellőztetjük, melynek mennyisége percenként kb. 0.5 térfogatrész, 1 térfogatrész tenyésztőanyagra. Kb. 5000 literes vastartályban erjesztő-táptalajt helyezünk el, melynek összetétele a következő: Keményitő 70 kg Szójababliszt 70 kg Kukoricafőzet szilárd anyaga 23V, kg Kalciumkarbonat 15 kg Nátriumklorid 231 /.. kg Víz 4540 l". Ezt a tenyésztő anyagot, nyomás alatt, kb. 120 C°-on kb. 30 percig folytatott hevítéssel sterilizáljuk, majd lehűtjük és a íeníi oltókulturával aszeptikusán beoltjuk. A mikroszervezeteket a tenyésztő anyagban 4 napig, 26 C"-ón, szaporítjuk. A tenyésztő anyagot a szaporítási periódus alatt kavarjuk és steril levegőt fúvatunk át rajta, még pedig percenként 1 térfogat tenyésztő anyagra 0.5 tér.-" fogatrész levegőt. A szaporítási periódus végén a tenyésztőanyag aníibiotikus aktivitása kb. 150 meg erythromycin/cnv1 tenyésztő anyaggal egyenértékű. A kb. 416 liternyi tenyésztő anyag pH-ját 40%-os nátriumhidroxid-oldattal 9.5-re állítjuk be, majd a miceliun eltávolítása céljából szűrjük, ahol is a szűrést pl. 3%, a kereskedelemben „Hyílo Super Cel" néven kapható szűrési segédanyaggal elősegítjük. A tiszta szűrietet amilacetáítal extraháljuk, mimellett 6 térfogatrész derített tenyésztő anyagra 1 térfogatrész amilacetátot használunk. Az amilacetát-kivonatot azután adagokban, kénsav hozzáadásával, kb. pH 5-re beállított vízzel extraháljuk. Kétszer extrahálunk, először y,, másodszor '/4 térfogatnyi oly vízzel, melynek pH-ját kénsavval 5-re állítottuk be. Az egyesített vizes kivonatok pH-ját nátriumhidroxid-oldattal 8-ra állítjuk be. A lúgos oldatot vákuumban, kb. 115 literre besűrítjük, majd az oldat pH-ját, vizes nátriumhidroxid hozzáadásával, 9.5-re állítjuk be és pihentetjük. Az erythromycin kristályos alakban válik ki. A kristályokat leszűrjük, az anyalúg pH-ját, híg kénsav hozzáadásával, kb.' 8-ra állítjuk be, majd vákuumban kb, 75 literre besűrítjük. Az oldatot, pH-jának kb. 9-re beállítása után, állni hagyjuk, amikor is további erythromycin-mennyiség válik ki, kristályalakban. A kapott erythromycin összes mennyisége kb. 256 g. Az erythromycint 2 :1 arányú vizes acetonból való ismételten átkristályosítással tisztítjuk. 2. Példa. E'rythromycin-hidroklorid előállítása. 1 g erythromycint 10 cm3 vízben szuszpendálunk és az elegy pH-ját, híg sósav hozzáadásával 6.5-re állítjuk be. A vizes oldatot vákuumban eredeti térfogatának kb. 1/10-ére besűrítjük és hűtőben lehűtjük, amikor is erythromycin-hidroklorid kristályos alakban kiválik. A sósavas sót etanol és éter elegyéből yaló átkristályosítással tisztítjuk. S. Példa. * Erythromycin-komplex előállítása. Oltási tenyésztőanyagot készítünk, melynek öszszetétele a következő: Keményítő 13.50 kg Szójabab-liszt , 13.90 kg Kukorica főzet szilára anyaga 4.50 kg Nátriumklorid 4.50 kg Kalciumkarbonát 2.70 kg Víz 945 liter A kb. 1320 1 térfogatú vastartályban tároló tenyésztőanyagot nyomás alatt, kb. 120 C°-on, 30 percig tartó hevítéssel sterilizáljuk. A sterilizált tenyésztő anyagot lehűtjük és- aszeptikus feltételek alatt Streptomyces erythreus. törzs M5—12559 spórával beoltjuk. A mikroszervezeteket kb. 26 C°-on, 35 óráig szaporítjuk a tenyésztő anyagban. A szaporítási időszak alatt a tenyésztő anyagot kavarjuk és percenként a tenyésztőanyag térfogatának felét kitevő térfogatú steril levegővel szellőztetjük. A szaporodási periódus végén a mikroszervezet vegetatív alakjának jó szaporulatát kapjuk. Kb. 5050 literes vastartályban az alábbi összetételű erjesztő közeget helyezzük el: Glukóz 113.4 kg Keményítő 113.4 kg Szójababra 213.1 kg Kukoricafőzet szilárd anyaga 41.80 kg Sörélesztő , 22,68 kg Kalciumkarbonát 9.10 kg Nátriumklorid 22.68 kg Kobaltklorid 125 ' g Víz 4536 liter A tenyésztő anyagot, az oltóanyag kapcsán ismertetett módon, nyomás alatt való hevítéssel sterilizáljuk, majd lehűlés után, aszeptikus feltételek mellett, kb. 472 liter fentleírt vegetatív oltóanyaggal beoltjuk és a mikroszervezeteket a tenyésztő anyagban 4 napig 26 C°-on szaporítjuk. A szaporítási időszak alatt a keveréket kavarjuk és steril levegőt fúvatunk át rajta, még pedig percenként 1 térfogatrész tenyésztő anyagra 0.5 térfogatrész levegőt. A tenyésztő anyagban foglalt antibiotikum mennyiségét a szaporítási periódus alatt, bizonyos időközökben az agar-hígítási módszerrel meghatározzuk. A 4 napos szaporítási időszak végén a tenyésztő anyagban foglalt antibiotikum mennyisége egyenértékű kb. 250 meg erythromycin pro cmtenyésztő anyaggal. A szaporítási időszak alatt a tenyésztő anyag pH-ja eredeti 6.2 értékéről 8-ra emelkedik. Az antibiotikumot a tenyésztő anyagtól, erythromycin-komplex alakjában, a következőképpen különítjük el: A tenyésztő anyagot 3%, a kereskedelemben Super-Celnéven kapható szűrési segédanyaggal sajtón megszűrjük. A szürletet kb. 400 1 petroléterrel foganatosított extrahálással zsírtalanítjuk. Az extrahált szürlet pH-ját, nátriumhidroxid hozzáadásával, kb. 8.5-re állítjuk be és két 1000 literes etilacetátadaggal extraháljuk. Az etilacetát-ki vonatokat egye sítjük, majd vákuumban bepárologtatjuk, amikor is kb. 661 g sötétbarna, szilárd anyagot kapunk. Ezt petroléterrel szétdörzsöljük, amikor is világos cser-
