127956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korionos anyag elszigetelésére

127956. 3 amilalkohollal 2 órahosszat összerázzuk. Ezután a kloroformos rétegtől centrifugálással és dekán tál ássál elválasztott vizes réteget pH = 5-re semlegesítjük, míg a kü-5 lönválasztott kloroformos és gél-réteget 250 cm3

vízzel még egyszer körülbelül egy órahosszat összerázzuk. Végül az elkülönített vizes rétegeket egyesítjük és körülbelül pH = 6 értéken térfogatuknak hatszo-10 roisát kitevő alkohollal, az egész térfogatra számított 2% szilárd nátriumaoetát 'jelenlétében kivonatolj uk. A kivonatot a csapadék kiválásához és a koaguláláshoz szükséges ideig állni hagy-15 juk; ezután a kapott csapadékot centrifugálással és szűréssel elkülönítjük. A megszárított csapadék súlya körülbelül 5—6 g és hatásossága 6000 Evans-egység körül van, ha a kiindulási anyag hatásosságai 20 grammonként körülbelül 30 Evans-egység volt. Ezzel a második kloroformos kezeléssel az első frakcióban jelenlevő fiziológiai hatásosságnak 98»/o-át kinyertük. A második kloroformos kezelésből szár-25 mázó frakciót a leirt módon, de kisebb mértékben, újra kezeljük, vagyis diahzáljuk és újra kloroformmal rázzuk össze, ahelyett, hogy az egyesített vizes rétegeket alkohollal csapnók ki, a kicsapást két 30 fokozatban végezzük. Az első kicsapási fokozatban az egyesített vizes rétegek pH-ját először 7,5—8,0-ra állítjuk be és 1,73 térfogat 95°/o-os alkoholt, valamint az egész folyadéktérfogatra számítva 2,5o/o nátrium-35 acetátot adunk hozzá. Csapadékot kapunk, melyet (körülbelül 20 C°-on vagy ennél alacsonyabb hőmérsékleten) néhány órán át ülepítünk és azután lecentrifugálunk. A felül úszó tiszta folyadékból, ha még 40 több nátriumaoetátot adunk hozzá és gondosan körülbelül 20 C°on vagy ennél alia-> csonyabb hőmérsékleten tartjuk, további csapadék esik ki. Az elválasztott csapadékot 6°/o alkohollal, melyben 2,5o/o nátrium-45 acetátot oldottunk fel, két ízben mossuk. A kapott mosófolyadékokat centrifugálás után a csapadék felett úszó első oldattal egyesítjük. A kicsapás második fokozatában az első 50 kicsapás egyesített oldatait kellő mennyiségű ecetsav hozzáadásával pH = 6-ra állítjuk be és két térfogat alkoholt, valamint az egész térfogatra számított 1% nátriumacetátot adunk hozzájuk. Az egészet kö-55 rülbelül 20 C°-on vagy még alacsonyabb hőmérsékleten több órahosszat állni hagyjuk, a képződött csapadékot lecentrifugáljuk, ismételten alkohollal mossuk és aoetonnal és éterrel szárítjuk. A korionos anyag, melyet így gyakorlatilag tiszta álla- 60 pótban kaptunk meg, grammonként körülbelül 130,000 Evans-egységnyi hatásosságú. A korionos anyag gyakorlatilag fehér, szagtalan és íztelen, 60o/0

-os etilalkoholban, mely 2,5o/o nátriumacetátot tártai- 65 maz, 60 o/o-os acetonban és általában vízzel keveredő szerves oldószerekben tökéletesen oldódik, kloroformban, dietiléterben, petróleumé térben oldhatatlan, pikrinsavval vagy bázisos ólomaoetáttal nem ad 70 csapadékot, szulfoszalicil savval és hasonló 'protein-reagensekkel negatív proteinpróbát ad és cisztinre nem ad reakciót. A korionos anyag proteinektől, még szérumnyálka-típuisúaktól is teljesen mentes és 75 embereknek adagolva, még 100 Evans^egységnyi adagokban sincs anafilaxiás hatása. A korionos anyag kifejezett abszorpciós spektrumot mutat, de éles olvadásponljja nincs. A termék vegyi szempontból körül- 80 belül 9,8o/o nitrogént tartalmaz és jobban hasonlít a protein szérumnyálka-típusábozi, mint valódi proteinhez. A molekulaszerkezetben valószínűleg egy protein-csoport, hexóz-amin-CíSoportok, hexóz-csoportok és 85 aoetil-csoportok vannak jelen. A hexózamin-nitrogén az egész nitrogénhez valószínűleg 1:12,3 arányban van. Valószínűleg egy hexóz-amin-csoport egy hexóz-csoporthoz kapcsolódik és az egész molekulát 90 figyelembe véve valószínű, hogy a hexózamin-csoportokban két aoetilcsoport van je^ len. Lehet, hogy ez a két aoetilcsoport csupán hexóz-amin-csoportokhoz kapcsolódik és lehetséges az is, hogy az acetil- 95 csoportok egyike a hexóz-amin amincsoportjával kapcsolódik vagy nem kapcsolódik. 2. Példa: í 21.5 g friss kancaplacentát, melynek ősz- íoo szes fiziológiai hatásossága 4300 patkányegység, igen alaposan felaprítunk és az aprított anyagot kivonatolás oéljíából 3 óra-> hosszat 215 cm3

vízzel rázzuk össze, amikor is a pH-értéket nátriumhidroxiddal 105 8,5-re állítottuk be. A kapott vizes kivonat dekantálása után a placental két ízben 107-107 cm3 vízzel, 3-3 órahosszat tovább kivonatoljuk. A vizes kivonatokat egyesítjük és pH- no értéküket megfelelő mennyiségű 2n-kénsav hozzáadásával körülbelül 3,9-re állítjuk be: A savanyú kivonatot 2 órahosszat azonos térfogatú etilénkloriddal rázzuk. Az eti-