127956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korionos anyag elszigetelésére
4 127956. lénkloriddal gél képződik. A vizes réteget centrifugálással a géltől és, illetőleg vagy az etilénkloridos rétegtől elválasztjuk, ezután 20°/o nátriumhidroxiddal sem-5 legesítjük, majd térfogatának 6-szoros, mennyiségét kitevő alkoholt adunk hozzá, mely kis százalékarányban nátriumacetátot tartalmaz; csapadék képződik, mely a korionos anyagot tartalmazza. A csapadékot 10 éis a folyadékot azonnal körülbelül 20 C°ra vagy még alacsonyabb hőmérsékletre1 lehűtjük; némi ideig tartó állás után a csapadékot elkülönítjük és az 1. példában megadotthoz hasonló módon megszárít-15 juk. A hozadék 500 mg anyag, melynek kísérletileg megállapított hatásossága grammonként 8000 p. e. A megszárított terméket 2 cm3 vízzel kis méretű, regenerált cellulózából készült 20 csőbe helyezzük és ellenáramban vezetett folyó vízzel 12 órahosszat dializáljuk. A dialízissel történt tisztítás után a korionos anyag kicsapására az oldathoz térfogatának 6-szorosát kitevő mennyiségű alko-25 holt, mely kevés nátriumacetátot tartalmaz, adunk. Körülbelül 45 mg fehér port kapunk, melynek kísérletileg megállapított hatásossága grammionként 82.000 p. e. Ha az etilénkloridos kezelést legalább 2-szer 30 végezzük és az alkohollal történő kicsapást az 1. példában megadott módon vezetjük, akkor a termék típusa és jellege a; z 1. példa szerint kapott termekéhez hasonló. 3. Példa: 35 Terhes nők szérumából 500 cm3 -t, melynek hatásossága 5000 egység és mely lo/o n átriuméi Iratot tartalmaz, kellő mennyiségű ecetsav hozzáadásával pH = 3,9 értékre állítunk be és az egészet 1 órahosszat 500 40 cm3 kloroformmal és 20 cm 3 ciklohexanonnal rázzuk. Kloroformmal gél-alakú csapadék képződik. Centrifugálás után a vizes réteget a kloroformos rétegtől és a géltől dekántálassal elkülönítjük és meg-45 szűrjük. A szűrlethez térfogatának 6-szorosát kitevő alkoholt adunk, mely kis menynyiségű nátriumacetátot tartalmaz és az» egészet azonnal legalább 20 C°-ra hűtjük le. Miután a reakciókeveréket több óra-50 hosszat állni hagytuk, a felül úszó tiszta folyadékot a képződött csapadékról le öntjük iés utóbbit ezután centrifugáljuk. A csapadékot acetonos és éteres kezeléssel megszárítva, a korionos anyagot tartalmazó 55 terméket kapjuk meg, melynek súlya 178 mg és összes 'hatásossága 4800 egység, illetőleg grammra átszámított alapon fiziológiai hatásossága 27000 egység. 'Az így kapott terméket 5 cm3 vízben feloldjuk, a pH-értéket 3,8-re állítjuk be 60 és a megsavanyított oldatot 5 cm3 kloroformmal rázzuk. Centrifugálás után a vizes réteget a kloroformos rétegtől és/vagy géltől elkülönítjük és a korionos anyag kicsapására 30 cm3 alkoholt adunk hozzá, 65 mely kis mennyiségű nálriumacetátot tartalmaz. Az egészet ezután több órán át 20 Cc -on vagy még alacsonyabb hőmérsékleten áll;ni hagyjuk, ezt követőleg a csapadékot centrifugálással különválasztjuk 70 és szárítókészülékben megszárítjuk. A száraz korionos anyag súlya 45 mg és fiziológiai hatásossága grammonként 90.000 egység. 4. P é Ida: 75 Terhes kancák plazmájából 21,5 litert ecetsavval pH=3,75 értékre beállítunk és. 100 g, 300 cm3 vízben oldott nátriumszulfátot adunk hozzá. E keveréket 2 órahosszat 10,75 liter kloroformmal és 400 80 cm3 amilalkohollal rázzuk. Centrifugálás után a körülbelül, 12 litert kitevő vizes réteget a géltől és a kloroformos rétegtől jelválasztjuk és legalább körülbelül 20 C°fa lehűtjük. A gélt, beleértve a folyékony 85 kloroformos fázist is, két ízben rázzuk és pedig mindenkor 12 liter vízzel, melyben 60 g nátriumszulfátot oldottunk fel,. Mind a 3 vizes réteget egyesítjük és 20= nátriumhidroxiddal pH = 6-7 értékre semle- 90 gesítjük. Ez a semlegesítés nem feltétlenül szükséges, de némiképen kiküszöböli a hormon megbomlásának veszélyét. Az egyesített oldatokat térfogatuk 5-6-szorojsát kitevő mennyiségű alkohollal kezeljük 95 'és a kapott csapadékot a felül úszó folyadék beszívatása és a maradék centrifugalása előtt legalább néhány órahosszat körülbelül, 20 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. A maradékot ezután acetonnal ke- 100 zeljük és éterrel és acetonnal történő mosás útján a szűrőn szárítjuk. A maradék súlya megközelítőleg 200 g, melynek több mint 90%-a só. A leírt módon kapott maradékot 1000 105 cm3 vízzel kivonatoljuk. A felül úszó folyadékot lecentrifugáljuk, félretesszük és körülbelül. 20 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten tartjuk, ezután pedig a maradékot még két ízben 200-200 cm? vízzel újra no kivonatoljuk. Ezt követőleg a maradékot félretesszük. Az első kivonatot jég és sói keverékével addig hűljük, míg csak jelen-
