127956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás korionos anyag elszigetelésére
2 1279 56. zes kivonatot készítünk. A vizes kivonatot legalább pH = 5, de előnyösen legalább pH = 4 értékre állítjuk be és térfogatának körülbelül felét kitevő, vízzel nem ke-5 veredő, semleges szerves folyadékkal rázzuk össze, annyi só jelenlétében, amennyi elegendő ahhoz, bogy a gél képződéséhez: szükséges villamos töltést létrehozza, de nem elegendő ahhoz, hogy a képződő több 10 réteg rákövetkező különválását zavarja. A korionos anyagot tartalmazó vizes réteget elkülönítjük és a kloroformmal való kezelést legalább még egyszer megismételjük, mielőtt a korionos anyagot a vizes 15 rétegtől elszigetelnők. A találmányt az alábbi példák kapcsán részleteiben ismertetjük. 1. Példa: 1,2 kg acetonnal szárított szérumport, 2o melyet terhes kancák plazmájából állítottunk elő, 5 órahosszat 8 liter vízzel kivonatolunk, melyhez annyi 20°/o-os nátriumlúdroxidot adtunk, hogy a pH-érték 8,5 legyen. Miután az egészet i/2 óralios» 25 szat centrifugáltuk, az oldatot az oldhatatlan .részekről dekantáljuk és azonnal körülbelül 20 C°-ra vagy még alacsonyabb hőmérsékletre lehűtjük. A dekantálás után visszamaradó maradékot még három ízben 30 kivonatoljuk, amikor is minden kivonatoláshoz megközelítőleg 4 liter vizet használunk és l-l órahosszat kivonatolunk, Mindegjdk vizes kivonatot az oldhatatlan részektől elkülönítjük és az első kivonat-35 hoz hasonlóan lehűtjük; ezután a négy kivonatot egyesítjük és az Egyesített kivonat pH-értékét kellő mennyiségű ecetsav hozzáadásával 3,8—4,0-ra állítjuk be. Az egyesített kivonatot térfogatának felét 40 kitevő mennyiségű kloroformmal és 300 cm3 amilalkohollal 2 1 / 2 órahosszat rázzuk és azután az egészet több órahosszat körülbelül 20 C°-on vagy még alacsonyabb hőmérsékleten állni hagyjuk. 45 A korionos anyagot tartalmazó felső vizes réteget a képződött kloroform-gél-rétégből centrifugálással és dekantálással különválasztjuk. A vizes réteghez azonnal annyi 20«/oo-s nátriumhidroxidoldatot 50 adunk, hogy pH-értéke körülbelül 6-ra álljon be és azt körülbelül 20 C°-ra vagy még alacsonyabb hőmérsékletre lehűtjük. A különválasztott kloroformos réteget, mely gélből és folyékony kloroform-fázis-55 bői van, egy órahosszat 3 liter vízzel 30 cm3 .amilalkohollal és 50,cm 3 30»/o-qs 'nátriumszulfátoldattal rázzuk.össze, hogy a kloroformos rétegben visszamaradt öszszes korionos anyagot eltávolítsuk. A vizes réteget, oentrifugálás és dekantálás 60 után, az előbb elkülönített vizes réteggel egyesítve, az összes mennyiség átlagban körülbelül 18 liter lesz. Ezzel az egyetlen kloroformos kezeléssel a vizes kivonatban jelenlevő proteineknek körülbelül 97—98 65 °/o-át eltávolítjuk. A proteineknek egy munkamenetben való csaknem teljes eltávolítása az eljárási lényegesen megkülönbözteti a nem-savas kloroformos kezeléstől, melynek segélyével a proteineket csak 70 részben lehet eltávolítani. Az egyesített vizes réteget térfogatának 5V2 -szer>esét kitevő denaturált szesszel (10°/o aceton) és az egész térfogatra számított lo/0 iiátriumacetáttal kezeljük és 75 pH-ját, ha szükséges, 6,5-re állítjuk be. Csapadék képződik, mely többek között a korionos anyagot is tartalmazza. Miután a csapadék leülepedését néhány órahosszat tartó állással elősegítettük, az üle- 80 dék felett levő alkoholt ledekantáljuk és az üledéket centrifugáljuk. A centrifugálással kapott szilárd részeket acetonnal összekavarjuk, leszívatjuk és acetonnal és éterrel megszárítjuk. Végül a szilárd ré- 85 széket szárítókészülékben kénsav felett megszárítjuk. A szilárd részek súlya körülbelül 100 g és a kiindulási anyag hatásosságának körülbelül 83°/o-át tartalmazzák. A vizes-lúgos oldattal végzett kivo- 90 Hatol áskor oldhatatlan anyag súlya száraz állapotban körülbelül 750—850 g és ez az anyag a kezdeti fiziológiai hatásosságinak körülbelül 10°/o-át tartotta vissza. A kloroform-gél megszárítva körülbelül 180 95 g súlyú és kezdeti hatásosságnak körül• belül 2 °/o -át vagy ennél kevesebbet tartalmazza. A korionos anyagot tartalmazó megszárított 'frakcióban 90—95°o nátriumszulfát is van, ami arra vall, hogy a pro- 100 teint az egyszeri kloroformos kezelés 99%on túlmenő mértékben eltávolította. A nátriumszulfát jelentékeny mennyisége szabványos dializáló művelettel távolítható el, melyet a frakció vizes oldalán regene- 105 rált cellulózahártyacső használatával végzünk el; mindamellett a só kis részét a rákövetkező második kloroformos kezeléshez szándékosan visszatartjuk. A dialízis után az oldat pH-értékét kellő 110 mennyiségű ecetsav hozzáadásával 3,8— 4.0-ra állítják be és a megsavanyított oldatot térfogatának felét kitevő kloroformmali., és ...kévés ... (oldatliterenként .20 cm3 )
