Dr. Murai Éva szerk.: Parasitologia Hungarica 16. (Budapest, 1983)

szobahőn hagyjuk beszáradni. A száradást hűvös levegő ráfúvatásával siettethetjük. Az így elkészitett lemezantigéneket tárgylemezfestő üvegdobozokban vagy selyempapírba csomagoltan több hónapig (4-6 hónapig) tárolhatjuk -20°C-on, az antigenitás károsodása nélkül. Az IFA reagensei a) FITC - antihuman IgGAM FITC - antihuman IgM(H) konjugátumok (Human Oltóanyagtermelő Int.). A konjugátumok munkahígítását előkísérletben, block titrálással kell megállapítani, ismert negatív, alacsony, ill. magas titerű savók felhasználásával. A szükséges hígítás fokát eléggé változónak találtuk (1:15 -100), ezért a titrálást minden charge-on el kell végezni. A titrálás során charge-onként meg kell győződni arról is, hogy a konjugátum nem tartalmaz-e toxoplasma antitesteket. Ezt direkt módszerrel vizsgáljuk, azaz a lemezantigén l-l reakcióhelyére csak a vizsgálandó konjugátumot visszük fel, savót nem. b) Foszfát pufferolt fiziológiás sóoldat (PBS) pH 7, 4 (0,1 5 M). c) Foszfát pufferolt glicerol pH 7, 4:glicerol és PBS 10: 1 arányú elegye. d) Evans kék kontrasztfesték 1%-os Evans blue törzsoldatot készítünk PBS-ben, s ezt 0,1% nátrium aziddal konzerváljuk. Kontrasztfestés alkalmazásakor a konjugátumot 0,2%-os Evans kék oldatban hígítjuk. Az IFA kivitele Az eljárást a különböző szerzők által leírt módszerváltozatok (1, 7, 8, 12) alapján adaptáltuk, kisebb módosításokkal. 1) A savóhígításokat a TAKÁTSY mikrotitrátor U lemezein készítettük elő. A kezdeti kisebb léptékú hígítási sorokat a későbbiekben lOx léptékűre módosítottuk, az 1. lépcső kivételével, így a vizsgálatsorozatban az első tájékozódást 1:5, 20, 200, 2 000 hígítási sorral végeztük. A végtiter megállapítására - szükség esetén - újabb vizsgálatot végeztünk. 2) A lemezantigént frissen készíthetjük és szárítjuk. Ha mélyhűtőben tárolt anyagot használunk, azt is szárítani kell exsiccatorban vagy levegő ráfúvatással. 3) A lemezantigént fixáljuk: 10 percig, metilalkohollal. 4) Mosás: 5 percig, PBS-ben. Az ismétlődő mosást célszerűen tárgylemezfestő üvegdobozban, a mosófolyadék többszöri mozgatásával, esetenként cseréjével, még hatékonyabban mágneses keverővel végezhetjük. 5) A vizsgálandó savó megfelelő hígításaiból l-l cseppet viszünk fel a lemezantigén reakcióhelyeire. Nedveskamrában inkubálás 37°C-on 30 percig. Ettől a lépéstől kezdődően vigyázzunk, hogy a reakcióhelyek ne száradjanak ki! 6) Öblítés PBS-el. Mosás 40 percig, legalább háromszor váltott PBS-ben. 7) A nedves, de felesleges folyadéktól megszabadított reakcióhelyekre l-l csepp konjugátumot viszünk fel, a megfelelő munkahígításban, kontrasztfestés esetén Evans Blue oldatban hígítva. Nedveskamrában inkubálás 30 percig, szobahőn. 8) Öblítés, majd mosás legalább 60 percig,4-5 ízben váltott PBS-ben.