Anders Alexandra – Lőrinczy Gábor szerk.: A Móra Ferenc Múzeum Évkönyve: Studia Archaeologica 12. (Szeged, 2011)

CSŐSZ Aranka - MENDE Balázs Gusztáv: Archeogenetikai vizsgálatok Szeged-Kiskundorozsma, Hosszúhát lelőhely 10. századi népességén

CSŐSZ Aranka - MEN DE Balázs Gusztáv helyiségekben, sterilezett eszközök felhasználásával kerülnek feldolgozásra. Eljárásaink tisztaságát minden esetben a munkafolyamatokba iktatott negatív kontrollok segítségével igazoljuk. Minden egyes minta mellett szerepel a hozzá tartozó negatív kontroll, mely a kontaminálódásból adódó esetleges hamis eredmények kiszűrését szolgálja. Minden mintát két, egymástól független mintavételnek (porításnak), a kinyert csontporokat portásonként legalább egyszeri DNS extrakciónak vetjük alá. A független extrakciókból két-két PCR terméket szekvenáltunk forward és reverz szálon. Munkánk során 11 sírból (1. táblázat) származó mintát vizsgáltunk. DNS extrakció Az archaikus minták mtDNS tartalmának kinyerésére a Dneasy® Tissue Kit (QIAGEN) részben módosított izolációs protokollját alkalmaztuk. mtDNS amplifikáció A mitokondriális DNS számunkra informatív szakaszát két rövidebb, egymással részben átfedő részből állítjuk össze. Illesztésük által a HVS1 régió 16020-16420-as pozíciói közötti, 400 bázisbáros (400 bp) mtDNS szakaszt kapunk. A felsokszorozási reakcióhoz elengedhetetlen primer régiók (összesen 40 bp) leszámítása után egy 360 bp-os szakaszunk marad. A mitokondriális kategóriák (haplocsoportok/haplotípusok) elkülönítésének alapja e szakasz „mutációs profilja

1', amit HVS2, illetve a mtDNS kódoló régió szakaszában elhelyezkedő mutációs pontok vizsgálata egészít ki. A használt primerek: L16040 (5''-TCTGTTCTTTCATGGGGAAG-3') Hl6239 (5'-GTGGCTTTGGAGTTGCAGTT-3') (TÖMÖRY ET AL. 2007); L16201 (5-AACCCCCTCCCCATGCTTA-3

r) H16401 (5' -TG ATTTC ACGG AGG ATGGTG-3') (KALMÁR ET AL. 2000). PCR reakció Ahhoz, hogy a kinyert minimális mennyiségű DNS-állományt detektálhatóvá és értékelhetővé tegyük, az örökítő anyag általunk vizsgálni kívánt részletét PCR technológia segítségével fel kell sokszorozni. Az amplifikáló elegy összetétele 40^1 végtérfogatban: lxAmpliTaq Gold-Puffer (Applied Biosystems), 25 pmol/jil primerenként, 800 |uM IdNTP (Fermentas), 1,5 mM MgCh, 4 mg/ml BSA (Sigma), 5 jul csont extraktum és 2 U AmpliTaq Gold-Polymerase (Applied Biosystems). Az amplifikációs reakció kondíciói: 95 °C 10 min, 34 cikluson keresztül: 94 °C 30 s, 55 °C 1 s, 72 °C 30 s és a végső extenzió: 72 °C 5 min. A PCR termékből 5 jLil-t futtattunk 8% Polyacrylamid gélen, melyben a DNS terméket ethidium-bromid festéssel tettük láthatóvá. A pozitív PCR reakció nem feltétlenül jelent eredményes vizsgálatot. Gyakran előfordul, hogy a sok nehézség árán a csontból kinyert és felamp1 ifikált PCR tennék rossz minőségű, és/vagy kevert örökítő anyagot takar. A felsokszorozott DNS „használhatóságával" minden esetben csak a munkafolyamat végén szembesülünk. Sze/a'enálás Az eredményes és kontamináció-mentes reakcióterméket Microcon Centrifuga Filter (Millipore) segítségével tisztítottuk és koncentráltuk 12 jal-ben. A szekvenálási reakciót ABI Prism 310 típusú szekvenátorral (PerkinElmer) végeztük, ABI Prism BigDye® Tenninator v3.1 Cycle Sequencing Ready Reaction Kit felhasználásával. A szekvenálásnál felhasznált primerpárok megegyeztek a PCR esetében alkalmazott primerekkel. Eredmények A megvizsgált 11 csontmaradvány mindegyikéből eredményesen vontuk ki a vizsgálatainkhoz szükséges mtDNS állományt és mindet haplocsoporthoz tudtuk rendelni a kapott mutációs pozícióik alapján (1. táblázat). A temető népességét alkotó 10 váz egyetlen kivételtől eltekintve (600. sír) klasszikus európai markereket képvisel. Ezen belül azonban a közösség heterogén, mivel nem találtunk teljesen egyező mutációs mintázatot hordozó szekvenciákat. A H klaszter az Európában legnagyobb gyakorisággal előforduló haplocsoport, a közösségen belül is ennek az anyai nyalábnak a jelenléte dominál, a 11 váz közül négynek a mutációi ezt a klasztert definiálták. A vizsgált szakasz polimorf pozíciói alapján egy-egy minta sorolódott a HV, az U és a J haplocsoporthoz, kettő a K nyalábhoz, míg egy minta mutációs pozíciói a kiterjedt, kelet-eurázsiai előfordulású F klasztert határozták meg. A többi temetkezéstől elkülönülten előkerült 100. sírban elhantolt férfi (BENDE-LŐRINCZY-TÜRK 506