Hidrológiai Közlöny 2008 (88. évfolyam)
6. szám - IL. Hidrobiológus Napok: „A Balaton és vízrendszere – a Balaton-kutatás története” és „A Duna-kutatás története” Tihany, 2007. október 3–5.
134 HIDROLÓGIAI KÖZLÖNY 2008. 88. ÉVF. 6. SZ. rú ciklikus szekvenálás módszerével végeztük, és ABI PRISM 310 Genetic Analyser segítségével elemeztük. A kapott szekvenciák filogenetikai hovatartozásának ellenőrzése a BLAST internetes adatbázis segítségével történt. A filogenetikai dendrogramokat Neighbor-Joining módszerrel Kimura-2 korrekcióval szerkesztettük. Eredmények és értékelésük Az univerzális primerekkel nyert 80 klóntermék 12, a Thiothrix-speciüiais 139 klóntermék 20 ARDRA-csoportot képezett. Mindkét klónkönyvtár proteobaktériumokhoz tartozó taxonokból tevődött össze, amelyek közül a gamma-proteobaktériumok általánosan előfordultak a közösségekben, míg a delta- és epszilon- proteobaktériumokat csak az univerzális primerekkel tudtunk kimutatni. A szulfidoxidáló Thiothrix-kénbaktériumok jelenlétét mindkét klónkönyvtárban bizonyítottuk, bár egyik esetben sem szerepeltek domináns közösségalkotóként. I BTlJ-62 ' Thiothrix ramosa (U 32940) _r BTU-80 — Thiothrix fructosivor ans (L79962) BTll-43 s*"— Thiothrix unzii (L79961) Thiothrix nivea (L40993) I Thiothrix flexilis (AB042545) 100> • Thiothrix defluvii (AFI 27020) ' Thiothrix disciforms (AB042532) rC • Thiothrix eikelhoomii (AB042819) I BTU-29 — Thiovirga sulfur oxydans (ABl 18236) BTlI-19 Tepidomonas igitava (AF177943) I.eptothrix discophora (Z18533) " Leptothrix mobilis (X97071) BTli-2 BTU-1 BTU-123 ( leohacter thiogenes (AF223382) Geohacter lovleyi (AY914177) " Geohacter pelophilus (U96918) j BTU-28 I— BTlI-14 " BTl -83 " BTH-79 Desulfocapsa thiozymogenes (X95181) Desulfocapsa sulfexigens (Y13672) Desulfobulhus elongatus (X95180) " Bacillus alcalophilus (X76436) 1. ábra. A büdöstapolcai karsztvízből univerzális primerekkel létrehozott klónkönyvtár reprezentánsait és a velük legközelebbi rokon baktériumfajokat bemutató filogenetikai dendrogram Az univerzális klónkönyvtár (/. ábra) feldolgozása a delta-proteobaktériumokhoz tartozó Desulfocapsa nemzetség tagjainak dominanciáját eredményezte 41,2 %-os közösségi aránnyal. A szulfátredukáló Desulfocapsa nemzetség tagjai mezofil szervezetek (optimális hőmérsékletük 30°C), elemi kén, szulfit vagy tioszulfát jelenlétében kemoautotróf módon növekednek (Finster és mtsai, 1998). A másik jelentős közösségalkotó klóncsoport (1. táblázat) az epszilon-proteobaktériumokhoz tartozott, amelynek képviselői (BTU-1, BTU-2) a legnagyobb szekvencia hasonlóságot eddig tenyésztésbe még nem vont környezeti klónokkal mutatták. A Thiothrix nemzetséget reprezentáló klónok (BTU62, BTU-80, BTU-43) a közösségben 9 %-ban voltak jelen, azonosításuk a T. ramosa, T. fructosivor ans, T. unzii fajok jelenlétére utalt (7. ábra), melyek a T. nivea csoport tagjai. A közösség klónjainak 5 %-a a legnagyobb szekvencia hasonlóságot az aerob, obligát kemolitotróf Thiovirga sulfuroxydans kénbaktériummal mutatta (Tsukasa és mtsai, 2005). A Geohacter thiogenes szekvenciájával legnagyobb hasonlóságot mutató klónok szintén 5 %-ban voltak képviselve. Ez a pálca morfológiájú, fakultatív anaerob baktérium, anyagcseréje során egyszerű szerves vegyületek (pl. ecetsav) bontásakor képes az elemi ként szulfiddá redukálni (De We ver és mtsai, 2000). A BTU-19 klón (1. ábra) legközelebbi rokona a Tepidomonas ignava aerob kemolitoheterotróf, tioszulfát oxidálására képes termofil baktérium, melyet egy portugál hévízforrásból izoláltak (Moreira és mtsai, 2000). A Thiothrix-specifikus klónkönyvtár (2. ábra) feldolgozása a Thiothrix nemzetségen belül az univerzális klónkönyvtárhoz képest nem eredményezett szélesebb faji diverzitást. A klónszekvenciák szintén a T. nivea csoport tagjainak szekvenciáival mutattak legnagyobb hasonlóságot (T. unzii, T. fructosivorans). Három reprezentáns klónt (BTT-J, BTT-M, BTT-S) pedig csak nemzetség szintjén sikerült azonosítani. A Thiothrix nemzetséggel legközelebbi rokonságot mutató klónok összesen 19 %-ban voltjelen.
