Fogorvosi szemle, 2014 (107. évfolyam, 1-4. szám)
2014-06-01 / 2. szám
46 FOGORVOSI SZEMLE ■ 107. évf. 2. sz. 2014. 2. ábra: Az oszteogén médium hatása patkány DPSC kultúrákra. A háromhetes kezelés végén a kálcium-tartalmú gócos lerakódásokat Kóssa- (A) és alizarinvörös (B) festéssel tettük láthatóvá. A kezeletlen kontroll tenyészetekben sem Kóssa- (C), sem alizarinvörös festéssel (D) nem tudtunk mineralizációs gócokat kimutatni. A mérce hossza 200 pm. 3. ábra: Neurogén differenciáltatás során változó morfológia fáziskontraszt mikroszkópiával követve. A: Kezeletlen tenyészet 3 nappal az izolálást követően. B: Az előkezelés 2. napjára a sejttestek felkerekedtek és vékony nyúlványokat növesztettek. C: Az indukció 3. napjára a sejtek nyúlványaikkal hálózatokba kezdtek rendeződni. D: Az érési fázis 7. napjára komplex hálózatok alakultak ki. A mérce hossza 100 pm. Oszteogén irányú differenciáltatás Az oszteogén médium hatására a patkány DPSC tenyészeteinken 3 hét után kalcium-tartalmú lerakódások képződtek, melyek mind Kóssa-, mind alizarinvörös festéssel pozitívan festődtek. A szintén csökkentett (1 “Zoos) szérumtartalmú, de oszteogén indukciós szereket nem tartalmazó kontroll tápoldatban tartott sejtkultúrák viszont nem mutattak mineralizációra utaló jeleket (2. ábra). Neurogén irányú differenciáltatás A humán DPSC tenyészetekre korábban kifejlesztett protokollunkat [18] alkalmazva teszteltük a patkány pulpa eredetű sejttenyészet idegi irányú differenciálódási potenciálját. Az előkezelés 2. napjára a patkány tenyészetben is felkerekedtek a sejttestek, és vékony nyúlványokat növesztettek. Az indukciós fázis során a hasonló morfológiájú sejtek közeledtek egymás felé és elkezdtek nyúlványaik révén hálózatba rendeződni, majd az érési fázis végére komplex hálózatok alakultak ki a többnyire csillag alakú sejtekből (3. ábra). A neurogén differenciáltatás végére a sejtek nagy része expresszálta a gliasejtekre jellemző GFAP fehérjét, valamint idegsejekre jellemző vázfehérjéket is, mint az NFM (neurofilament médium), illetve az N-TUB (vagyis neuro-tubulin). A mesenchymalis jellegre utaló vimentin továbbra is látható maradt, bár az expressziója a sejtek nagy részében lecsökkent (4. ábra). Neurogén differenciációs protokoll módosítása és a felületkezelés Mivel a patkány tenyészet esetében úgy tűnt, nem sikerül reprodukálni a humán tenyészetek 50%-hoz közeli differenciálódási rátáját [18], ezért módosítottunk a N-TUB 4. ábra: Immunfestés a neurogén differenciáltatás végén. Az érés 10. napján a patkány DPSC-k expresszálták a gliasejtekre jellemző GFAP fehérjét, valamint az idegsejtekre jellemző NFM és N-TUB fehérjéket. Ezeken kívül a mesenchymalis vimentin kismértékben továbbra is kifejeződött (VIM). A mérce 200 pm-t jelez. differenciáltató protokollon. Azonban nemcsak a médium összetétele van hatással a sejtek differenciálódási potenciáljára, hanem a monolayer-ben történő tenyésztés esetén a tenyésztőedény felülete is [9], Ezért hat különböző felületen differenciáltattuk a pulpa eredetű sejtjeinket. A módosított differenciáltatási protokoll végére (a második érési fázis 7. napján) a LA és PLL felületen hálózatokba kapcsolódó idegi morfológiájú elemek jelentek meg. Amennyiben a laminint lizinnel, vagy
