Fogorvosi szemle, 2014 (107. évfolyam, 1-4. szám)
2014-06-01 / 2. szám
FOGORVOSI SZEMLE ■ 107. évf. 2. sz. 2014. 47 5. ábra: A felületkezelés hatása az idegi irányba differenciáltatott patkány DPSC tenyészetek morfológiájára. A fáziskontraszt mikroszkópos felvételek a második érési fázis 7. napján készültek. A NTC felületen alig látható idegsejtre emlékeztető sejt, míg a LA és PLL felületen hálózatokba kapcsolódó idegi morfológiájú elemek jelentek meg. Ha LILA vagy ORLA felületen differenciáltattuk a tenyészeteket, több idegi morfológiát mutató sejt kapaszkodott hálózatba. Az FBS-sel kezelt felületen is hálózatokba rendeződtek a sejtek, de kevéssé mutattak idegi morfológiát. A mérce 100 pm-t jelez. módosulatával, az ornitinnel (aminek R-oldalláncán egy szénatommal kevesebb található) kombinálva kezeltük a tenyésztőedények felületét, több sejt kapaszkodott olyan hálózatba, amely idegi morfológiát mutat. Az FBS-sel kezelt felületen is hálózatokba rendeződtek a sejtek, de kevéssé mutattak idegi morfológiát. A NTC felületen pedig csak elvétve találtunk neuronális morfológiájú sejtet (5. ábra). A kvantitatív PCR segítségével vizsgált markerek expressziója is változott a felületkezelés függvényében. Az axonnövekedésért felelős intermedier filamentumfehérje, a nestin kifejeződése nőtt a PLL, valamint a LILA és ORLA kombinációjával kezelt felületen. Az NSE mennyisége egyedül a lamininnel kezelt felületen emelkedett. A mesenchymalis vimentin, valamint az idegi markerek közül az NFM és az NSE expresszióját mindegyik felületkezelés csökkentette. Az FBS-sel kezelt felületen minden vizsgált marker expressziója csökkent (6. ábra). Megbeszélés Munkánk során patkány metszőfogak pulpaszövetéből izoláltunk sejteket, melyekből sikerült több passzázson keresztül fenntartható sejttenyészeteket rutinszerűen létrehoznunk. A korai passzázsok döntően fibroblasztszerű morfológiát és intenzív sejtproliferációt mutattak, ami progenitor, illetve őssejt tulajdonságú sejtek jelenlétére utal. Megfigyeltük, hogy a passzázsszám növekedésével a sejtpopulációk duplázódási sebessége lecsökkent. Flumán őssejttenyészetek esetében is leírtak már hasonló jelenséget [14, 15, 24], melyet feltehetően a passzálás során alkalmazott tripszin vált ki, mivel aktiválja a Ca2+-indukálta jelátviteli útvonalakat, és ezáltal a sejtek elkezdenek spontán differenciálódni [1,33]. A hosszú ideig történő passzálás során tehát a sejtek nagy része elveszíti osztódási képességét, illetve kiszelektálódik egy nem-osztódó, már differenciált populáció. Erre utal a passzálások következtében fellépő morfológiai változás is. A patkány pulpasejtek izolálásán túl a tenyésztési körülményeiket is optimalizáltuk. Megállapítottuk, hogy 5-10% szérumkoncentráció a legkedvezőbb a patkány DPSC-k számára a legintenzívebb proliferáció és a dif-6. ábra: A felületkezelés hatása az idegi irányba differenciáltatott patkány DPSC tenyészetek génexpressziójára. Az ötféle felületkezelés (FBS, PLL, LA, LILA, ORLA) esetében a vimentin (VIM), nestin, neurotubulin (N-TUB), neurofilament medium (NFM), neurospecifikus enolàz (NSE) mRNS szintű expressziója. A Q-PCR vizsgálat során kapott eredményeket a kezeletlen (NTC) felület értékeire vonatkoztatva adjuk meg.
