Szemészet, 2003 (140. évfolyam, 1-4. szám)
2003-09-01 / 3. szám
ketaminnal altattuk és kiegészítésképpen helyi érzéstelenítést (Humacain 0,4%, Human, Gödöllő) is alkalmaztunk. A beavatkozások az Asclepion-Meditec MEL 70G_scan (Jena, Németország) készülékkel történtek. A hámot hockey késsel távolítottuk el és -6,0 D-s kezelést végeztünk, 6 mm-es ablációs átmérővel. A műtét végén Neomycin és Indosol cseppentést alkalmaztunk, majd a corneákat hagytuk spontán behámosodni. A posztoperatív szakban rögzítettük a cornea állapotát, elsősorban a hámosodás, fekély- és haze-képződés tekintetében. Az infiltrációval, ulcusképződéssel gyógyuló eseteket az apoptosis pontos megítélése érdekében a további vizsgálatokból kizártuk. Az állatokat 1, 4, 7, 14 és 28 nappal a műtét után túlaltattuk és a corneákat a fenti 5 csoportba osztva szövettani vizsgáknak vetettük alá. Az egyes csoportokba rendre 4, 4, 5, 2, 2 állat tartozott. Kontrollként az állatok kezeletlen bal szemét használtuk. Az eltávolított szaruhártyákat pufferolt formaiinban fixáltuk és paraffinba ágyaztuk. Az áttekintő szövettani értékeléshez, hematoxilin-eozinos és PÁS festést alkalmaztunk. Az apoptosis elemzését HE-festett metszetekben morfológiai jelek alapján és a TUNEL-próbával (terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP-digoxigenin nick-end labelling assay) végeztük, a korábban leírtak szerint.10 1. ábra. Négy nappal a fotorefraktív keratectomia után kerek sejtes beszűrődés mellett apoptoticus sejt jelenléte igazolható a stromában. (TUNEL-próba, eredeti nagyítás 40x) Eredmények A PRK-műtéten átesett szemek spontán módon behámosodtak. Haze-képződést két esetben figyeltünk meg (egyet 1 héttel és egyet 2 héttel a beavatkozás után túlaltatott állatnál). Kifejezett posztoperatív gyulladás (infiltráció, ulcus) a 17 kezelt szaruhártya közül háromnál fordult elő (2 db négynapos, 1 db hétnapos esetben), ezeket a corneákat a vizsgálatból kizártuk. Egy nappal a kezelés után csak a hámhiány alatti stroma eosinophil és plasmasejtes beszűrődését észleltük. Keratocyta-apoptosis 4, 7 és 14 nappal a fotorefraktív keratectomia után volt kimutatható. Négy nappal a beavatkozás után az epithelium a kezelt területnek megfelelően helyenként elvékonyodott, helyenként kiszélesedett. A cornealis stroma felső harmadában szintén kerek sejtes beszűrődést találtunk. Az egyik esetben a hámhiányos terület alatti stromában több apoptoticus sejt jelenlétét lehetett igazolni (I. ábra). Egy hét után a hámréteg mind a négy esetben a kezelésnek megfelelő területen kissé egyenetlen volt, kiszélesedett vagy elvékonyodott. A stromában plasma-, eosinophil sejtes és lymphocytás beszűrődést találtunk. Egy esetben - a klinikailag haze formát mutatónál - a kollagénrostok elvékonyodtak, lefutásuk kifejezetten egyenetlen volt. Egy cornea esetében pedig a stroma felső harmadában 1-1 apoptoticus sejtet mutattunk ki (2. ábra). Két héttel a műtét után kisfokú stromalis eosinophil sejtes beszűrődést találtunk. A TUNEL-próba több apoptoticus keratocyta jelenlétét is igazolta mind a transzparensen, mind a haze-zel gyógyuló szaruhártyában (3., 4. ábra). A négyhetes corneákban a basalis membrán és a rostállomány egyenetlen lefutást mutatott. Apoptosis nem volt igazolható. A egészséges kontrollcorneákban apoptosis nem volt kimutatható. 2. ábra. Hét nappal a fotorefraktív keratectomiát követően számos gyulladásos sejt mellett a stromában 1-1 apoptoticus sejt látható. (TUNEL-próba, eredeti nagyítás 40x) Szentmáry Nóra
