Szemészet, 1999 (136. évfolyam, 1-4. szám)
1999-06-01 / 2. szám
Szemészet 98 két fő típusuk különíthető el: az ún. tandem scanning konfokális mikroszkóp (TSCM) és az ún. slit-scanning (nevezik flying-slit-nek is) konfokális mikroszkóp. 1. Tandem scanning konfokális mikroszkópia (TSCM). A jó felbontóképesség érdekében pontszerűen fókuszált fényforrást használnak. Az értékelhető kép ily módon a pontszerű fényforrással való pásztázásból tevődik össze. A készülék lényege az ún. Nipkow-féle korong, melyben több ezer speciálisan elrendezett apró, 20-80 pm átmérőjű lyuk van. Elvileg minél kisebbek a lyukak, annál jobb a leképezés, de ennek a diffrakció határt szab. A fény átjut egy lyukon és az objektív lencsén keresztül eléri a comea aktuálisan fókuszált rétegét. A visszaverődő fény egy tükörrendszer segítségével a korong túloldalán lévő, az előzővel konjugált (tandem) lyukon keresztül éri el a detektort. Ezáltal I. ábra. Tandem scanning confocalis mikroszkóp működési elve. I. Fényforrás 2. Nipkow-korong 3., 6. Eltérítő tükörrendszer 4. Objektív 5. Cornea 7. Detektor fókuszált ponton kívüli fény nem juthat el a detektorhoz. A Nipkow-korong rotációs mozgást végez. Az objektív mozgatásával (x, у és z síkban) a cornea más és más területei vizsgálhatók. (1. ábra.)35 A konfokális elv miatt jó minőségű képek nyerhetők még mérsékelten borús cornea esetén is. A képminőséget a Nipkow-korongban lévő lyukak mérete, száma, a korong forgási sebessége is meghatározza. A detektor általában képerősítővel ellátott videokamera. A vizsgálat egy tv-képernyőn keresztül követhető és későbbi értékelés céljára videoszalagra felvehető. 2. Slit-scanning confocalis mikroszkópia.3,7 A készülék 2 db ún. konfokális rést használ, melyek elektromágneses úton mozgathatók, egymással szinkronizáltak. Az egyik rés a fényforrás, a másik a detektor előtt található. A rések optikai tulajdonságuk miatt a gyakorlatban egydimenzionálisnak tekinthetők. A rések és a tükörrendszer mozgatásával történik a scannelés. A fókuszált comearétegről visszaérkező kép a résen keresztül videokamerába jut, ahol S VHS minőségű valós idejű felvétel készül (2. ábra). A készülék objektív lencséjét axiális irányban (a z tengely mentén) mikrométercsavarral a vizsgáló mozgatja, de lehetőség van automatikus scannelésre is, amikor is egy mikroprocesszor vezérelte léptetőmotor 1 mm/sec sebességgel mozgatja az objektívet. Az optikai scannelő rendszer és a video 25 Hz frekvenciával szinkronizált. Ebből adódik, hogy egy adott cornearétegben lévő sejt ábrázolódásának ideje 0,66 ms! A keletkező képet a cornea mozgása kedvezőtlenül befolyásolja, de ilyen rövid idő alatt bemozdulás igen ritka. Immerziós objektív használatos, mely lehet 25x-ös, 40xes vagy 50x-es nagyítású. Az elérhető össznagyítás 800-1000x-es. A laterális felbontóképesség (x, y) a használt objektívtői függően 1-2 pm! Az axiális felbontóképesség (z tengelyben) 10-14 pm, azaz ilyen vastag (illetve vékony) optikai szeletek nyerhetők. A Z-scan 2. ábra. Slit-scanning confocalis mikroszkóp működési elve. 1. Fényforrás 2. Konfokális rések 3. Fotometriás egység 4. Videoképerősítő 5. Monitor 6. Objektív 7. Cornea 8. Z-scan A cornea egyes rétegein és sejtjein kívül a készülék alkalmas a comea axiális fényszóródási profdjának ábrázolására is, ezt Z-scannek nevezik.7 A vizsgálat során az objektív fókuszát léptetőmotor mozgatja a könnyfilmtől a csarnokig, így a cornea minden rétegének reflexiós viszonyairól kapunk felvilágosítást. Álló rés mellett a cornea teljes vastagságát egymás után számos alkalommal mikrofotometriás úton vizsgálja. A reflektált fényt egy fotoszenzor érzékeli és a fényintenzitást a comea vastagságának függvényében ábrázolja (3. ábra). Az első csúcs a könnyfilm-epithel határ. J, i 1 Л . /1 CSARNOK CHtance j ,’r ixn 3. ábra. Az ún. Z-scan. 1. Epithel-csúcs 2. Endothel-csúcs Imre László
