203983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfipestis elleni élő vakcina előállítására
1 HU 203 983 B 2 A találmány tárgya eljárás baromfipestis elleni élő vakcina előállítására az NDV-6/10 jelű törzsből. A baromfipestissel, annak vírusával és a betegség ellen használt vakcinákkal, valamint ezek alkalmazási módjával kapcsolatos nagyon bőséges szakirodalmi adatokat tartalmaz D. J. Alexander és szerzőtársai: Newcastle Disease című könyv (Kluvver Academic Publishers, 1988). A továbbiakban ebből a műből emelünk ki információkat. A baromfipestis (Newcastle disease, általános rövidítéssel ND) megelőzésére világszerte két nagyon alacsony virulenciájú baromfipestis-vírus (NDV)-törzset használnak vakcinaként: az amerikai eredetű LaSota és a B-l jelű (lentogén) NDV törzseket. A B-l törzsről 1948-ban állapították meg, hogy nem patogén és fogékony csirkékben immunitást alakít ki. A LaSota törzset 1946-ban izolálták, s egybehangzó a kutatóknak az a véleménye, hogy jobb védelmet ad, mint a B-l törzs. Mindkét törzsből azonos módon állítják elő a vakcinákat. E közismert módszer részleteit illetően utalunk Allan, W. H., Lancaster, J. B. és Tóth, B. „The production and use of Newcastle disease vaccines” (FAO, Róma, 1973.) összefoglalójára. A fenti két törzsből készült vakcinákat a világ számos országában használják. A B-l törzset, mivel alacsony patogenitású (napos csirkék agyvelő indexe 0,2; az embriókat átlagosan 120 óra alatt pusztítja el), általában a fiatal csirkék első immunizálására használják, többnyire 1-2 hetes korban. Ugyanis, ha az immunizálandó állatok vérsavója baromfipestis elleni ellenanyagokat tartalmaz (akár tojóktól számlázó szikeredetűt), a B-l törzs a szervezetben kellő mértékben nem szaporodik el, s így immunogén hatása nem lesz kielégítő. Ezért általában akkor használják, amikor a szikeredetű ellenanyagok szintje csökken. A B-l törzsnél valamivel magasabb patogenitású LaSota törzs (agyvelő indexe 0,4; a vele oltott embriók átlagos elhullási ideje 103 óra) jobban immunizál, de 3 hetes vagy fiatalabb állatok (különösen spray-vel, vagy aeroszollal történő) immunizálás után légzőszervi tünetekben, testtömeg-gyarapodás átmeneti csökkenésében mutatkozó oltási reakciót mutathatnak. Főleg mycoplasmosissal fertőzött állományokban ennek gazdasági kihatása jelentős lehet. Ezért a LaSota törzsből készült vakcinát pl. Angliában nem engedik használni. LaSota törzsből, nevezetesen a P/76/5 jelű törzsből készült élő vakcina előállítását ismerteti a 179290 sz. magyar szabadalmi leírás. Az oltási reakciók mérséklésére a LaSota törzsből „alacsonyabb stresszfaktoní” kiónokat szelektáltak, s közülük a Clon 30 nevűből kereskedelmi forgalomban lévő vakcina is készül (gyárja: Intervet, Hollandia). Külföldi és hazai adatok szerint a Clon 30 vakcina után némileg kevesebb oltási reakció jelentkezik, de az adatok állományonként nagy szórást mutatnak. A B-l és a LaSota törzsekből készült vakcinákat legáltalánosabban az ivóvízben adagolják. Mivel a szikeredetű ellenanyagok a szájon át bejutó vírus szaporodását gátolják (a B-l törzset jobban, mint a LaSotát), az első itatást 1-3 hetes korban ajánlják. Az e törzsekkel készült vakcinákkal a kötőhártyára vagy az omircgbe történő cseppentéssel is lehet immunizálni, de az nagyon munkaigényes. Éppen a munkaigény csökkentése érdekében ajánlják a spray vagy aeroszol formájában történő immunizálást. Egyértelmű a megállapítás, hogy ezen az úton jobb védelem érhető el, mint az itatásos vakcinálás után, de az oltási reakció kockázata is nagyobb. Különösen a LaSota vakcina után és általában akkor, ha a vínist tartalmazó cseppecskék mérete kicsi. Minél kisebb ugyanis a cseppecskék mérete, a légutak annál mélyebb részeibe kerül a vírus, ami szaporodásának kedvez, de ezzel (főleg mycoplasmosistól nem mentes állományokban) az oltási reakció kockázata nő. Ez a legfőbb oka, hogy a B-l és a LaSota vakcinákat főleg a nagyobb cseppeket (>30 pm) produkáló spray készülékkel porlasztják el, míg aeroszol formájában (cseppecskeméret 1-10 pm) általában csak növendék és felnőtt (lehetőleg mycoplasmosistól mentes) állományok immunizálása ajánlott. Sőt a téma nemzetközileg elismert két szakértője Allan és Borland a LaSota törzs aeroszolját naposcsibéknek egyenesen veszélyesnek találták (1. az id. mű 325. oldalát). Korábbi vakcinák légzőszervi patogenitását vizsgálva egy újabb jelenséget is észleltünk: mind a LaSota, mind a B-l törzs, még a kevésbé veszélyes itatásos módszerrel való vakcinálás után is, az itatást követően 8-10 nappal megjelenő náthaszerű tünetekkel járó megbetegedésből visszatenyészthető. A vírust csak a LaSota vínist felismerő monoklonális ellenanyag segítségével azonosítani lehetett (Erdei Judit és munkatársai: Magy. Áo. Lapja, 1988. 43,267.). Ez okból célszení lenne a LaSota és B-l, valamint származék-variánsaikat gyengébb törzzsel helyettesíteni. A fenti törzsekkel végzett vakcinálás további hátránya, hogy a két-három hetes korban végzett immunizálás napokra visszaveti a testtömeg-gyarapodás ütemét, ami a nagyüzemi tartásnál komoly veszteségeket jelent. A találmány célja a fenti hátrányok kiküszöbölése mellett újfajta élő vakcina kifejlesztése baromfipestis ellen. A kitűzött célt olyan vakcina előállításával értük el, amelyhez egy lentogen NDV törzset, nevezetesen az NDV-6/10 jelű törzset alkalmaztuk. A találmány tárgya tehát eljárás baromfipestis elleni élő vakcina előállítására oly módon, hogy előkeltetett tyúktojásokat NDV-6/10 törzzsel beoltunk, tenyésztünk, a megfelelő vínistíter elérése után az embriókat elpusztítjuk, és az allantois-folyadékot összegyűjtjük. Előnyösen úgy járunk el, hogy a tyúktojásokat mintegy 9 napig előkeltetjük, és az NDV-6/10 törzzsel történt beoltás után 60-110 órán át, előnyösen 72-96 órán át, 35-40 °C-on, előnyösen 37 °C-on inkubáljuk, amíg a megfelelő vírustitcrt el nem érjük. A megfelelő vírustiter érték legalább 10s EID50, amelyet tojásembrión történő titrálással és haemagglutináció gátlási próbával határozunk meg. A megfelelő vínistíter elérése után az inkubált tojásokban az embriókat - előnyösen lehűtéssel - elpusztítjuk, az allantois-folyadékot leszívatjuk, és baktériumtisztaságra történő vizsgálat után oltóanyagként kiszereljük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
